腎臓における補体調節蛋白の役割の解明とその治療応用

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11671030
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 南学 正臣 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (90311620)
• 研究分担者: 奥田 俊洋 東京大学, 保健センター, 助手 (80177170)
• キーワード: 糸球体腎炎 / 腎不全 / 補体 / 補体調節蛋白 / 蛋白尿 / 尿細管 / ネフローゼ / メサンギウム

研究概要

腎不全の原因として多い糸球体腎炎の発症および進展には、補体の過剰な活性化が重要な役割を果たす。一方、生体はこのような補体の過剰な活性化に対する防御機構として補体調節蛋白を備えている。初年度の研究では、糸球体腎炎における可溶性補体調節蛋白の発現調節を調べ、更に蛋白尿に含まれる補体成分の尿細管間質障害の進行に果たす役割と、これに対する生体防御機構としての尿細管および糸球体における補体調節蛋白についての解析を行なった。本年度は、以上の研究を発展させ、補体調節蛋白を用いた治療応用の可能性を探った。
in vivoでは、糸球体細胞への遺伝子導入は技術的に難しいため、可溶型の補体調節蛋白をin vivoで過剰発現させることによる腎炎治療を目指した。可溶型の補体調節蛋白としては、C3/C5 convertase stepで働く強力な補体調節蛋白として知られるCrryを、PCRなどを用いたmutagenesisにより遺伝子工学的に膜貫通部位を除去することにより作成した。可溶型Crryにはmutagenesisでtagを付け、血中濃度測定を容易にした。これと平行して、筋肉、肝臓を含めたどの臓器へ遺伝子導入するのが効率がよいのか、またplasmidのdirect injection、adenovirus、cationic liposomeなどのどのような導入方法を用いるのがよいのかを調べ、adenovirusを静注して肝臓において可溶型補体調節蛋白を発現させることが望ましいという結論を得た。現在、可溶型Crry発現adenovirusベクターの有効性をin vitroでの補体依存性の溶血反応に対する抑制能として確認を終了し、今後腎炎モデルを使用してin vivoでの効果を調べる予定である。

研究成果

• [文献書誌] Hori Y et al.: "Crry, a complement regulatory protein, modulates renal interstitial disease induced by proteinuiria."Kidney International. 56. 2096-2196 (1999)
• [文献書誌] Nangaku et al.: "Complement membrane attack complex (C5b-9) mediates interstitial disease in experimental nephrotic syndrome."Journal of American Society of Nephrology. 10. 2323-2331 (1999)
• [文献書誌] Hughes J et al.: "The C5b-9 membrane attack complex mediates endothelial cell apoptosis in experimental glomerulonephritis."American Journal of Physiology. 278. F747-757 (2000)
• [文献書誌] Yamada K et al.: "Clusterin is up-regulated in glomerular mesangial cells in complement-mediated injury."Kidney International. 59. 137-146 (2001)
• [文献書誌] 南学正臣 他: "補体調節蛋白と腎炎治療"腎と透析. 48. 215-218 (2000)
• [文献書誌] 南学正臣: "慢性糸球体腎炎における補体、補体調節蛋白の役割"Mebio. 17. 20-27 (2000)