リポ蛋白糸球体症のモデル動物作製と病態解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11671064
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 松永 彰 福岡大学, 医学部, 講師 (60221587)
• 研究分担者: 佐々木 淳 福岡大学, 医学部, 助教授 (90122697)
• キーワード: リポ蛋白糸球体症 / 遺伝子変異 / トランスジェニックマウス / アポE

研究概要

リポ蛋白糸球体症は、日本で新たに発見された腎疾患で、III型高脂血症に加えて蛋白尿、腎機能障害を引き起こし、病理組織学的に糸球体内にアポEを含むリポ蛋白血栓症を特徴とする疾患であるが原因は不明であった。リポ蛋白糸球体症の独立した3家系を調べた結果、全ての症例でアポE変異体、アポE2(Arg145Pro)Sendaiを発見。続いてこのリポ蛋白糸球体症と密接に関係するアポ蛋白E変異体、アポE2Kyoto(Arg25Cys)、アポE1(del141-143)、アポE1(del156-173)の3種を発見した。さらにアポE変異とリポ蛋白糸球体症の関連及び発症機序を解明するため、リポ蛋白糸球体症のモデル動物としてアポE1(del141-143)トランスジェニックマウスの作製を行った。プロモータ部位を含む正常ヒトアポE遺伝子(11.5kb)に、アポE1(del141-143)変異をsite directed mutagenesisを用いて導入。全配列を確認し、変異導入アポE遺伝子を制限酵素HindIIIで切断し、直線鎖DNAとして精製。共同研究にて、熊本大学動物資源開発研究センターに輸送し、単離直線化アポE遺伝子をミクロマニピュレーターにより受精卵の前核に注入し、偽妊娠仮親C57BL/6雌マウスの卵管に移植した。しかし、同センターで病原ウイルス感染に遭遇し、初回に得られたマウスは屠殺された。2回目の作製にて7匹のマウスが得られ、スクリーニングを行ったところ、雌1匹でヒトアポE遺伝子を確認した。その後繁殖を試みているが、F1マウスでのヒトアポE遺伝子発現率が低く、現在までに雄2匹でアポE1(del141-143)変異発現マウスを見いだした。

研究成果

• [文献書誌] Huang W,Sasaki J,Matsunaga A, et al.: "A single amino acid deletion in the carboxy terminal of apolipoprotein A-I impairs lipid binding and cellular interaction."Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20. 210-216 (2000)
• [文献書誌] Kobayashi J,Murano S,Yokote K,Mori S,Matsunaga A, et al.: "Marked decrease in plasma apolipoprotein A-I and high density lipoprotein-cholesterol in a case with Werner syndrome."Clinca Chimica Acta. 29.3. 63-73 (2000)
• [文献書誌] Imanaga Y,Sakata N,Takebayashi S,Matsunaga A, et al.: "In vivo and in vitro evidence for the glycoxidation of low density lipoprotein in human atherosclerotic plaques."Atherosclerosis. 150. 343-355 (2000)
• [文献書誌] Hirayama S,Kobayashi J,Taira K,Hikita M,Bujo H,Matsunaga A, et al.: "Marked elevation in serum apolipoprotein E in a case of heterozygous cholesteryl ester transfer protein deficiency."Clinca Chimica Acta. 301. 55-64 (2000)