| 研究課題/領域番号 |
11671204
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
溝井 賢幸 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90271949)
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| 研究分担者 |
片寄 友 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (20302151)
石井 誠一 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (60221066)
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| キーワード | 消化器癌 / 大腸癌 / 血管内皮 / 血管内皮前駆細胞 |
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| 研究概要 |
1)ヒト末梢血中からの血管内皮前駆細胞(EPC)の単離
EPCはCD34陽性で、フィブロネクチンコーティング上で付着・増殖するとの報告がある。末梢血より、Ficoll-Paqueにて単核細胞を分離し、さらに抗CD34抗体と磁気ビーズを用いてCD34陽性単核細胞を分離した。この細胞を、フィブロネクチンをコーティングしたプレートと未コーティングのプレートにて培養した。培養48時間後には、フィブロネクチンコーティングをしたプレート上に紡錐型の接着性細胞が出現した。この細胞を、CD34陰性単核細胞と混合培養すると、分化増殖がさらに増強し、血管様構造や紡錐型細胞が放射状に遊走するコロニーなども認められた。この紡錐型細胞は、蛍光抗体法によるCD34の免疫染色でCD34陽性であることが確認された。また、血管内皮細胞でみられるアセチル化LDLの取り込みがあることも確認された。
2)in vivoでの検討
免疫不全マウスの皮下に、ヒト大腸癌細胞株を2X10^6個注入し皮下移植モデルを作製した。ヒトEPCを蛍光色素BCECF-AMでラベルした後、移植後2週間後のマウスの尾静脈より注入した。注入1週間後、腫瘍部位を摘出し、凍結切片を作製し、蛍光顕微鏡にて観察した。しかしながら、腫瘍部には蛍光色素陽性の細胞は認められなかった。蛍光色素のラベリングに問題がある可能性があり検討中である。また、細胞株により反応が異なる可能性もあり、異なる大腸癌細胞株での検討も行っている。
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