肝脾外科における肝細胞増殖因子の遺伝子導入に関する研究-硬変肝切除後肝再生、脾自家移植に対する効果の検討-

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11671273
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 山口 真彦 昭和大学, 医学部, 講師 (00266149)
• キーワード: アデノウイルスベクター / HGF / 肝再生 / 肝傷害 / 脾自家移植

研究概要

障害肝切除後の良好な肝再生、あるいは脾摘後脾自家移植の良好な生着を目的として、adenovirus vectorを用い、肝細胞増殖因子(HGF)の遺伝子導入を行うことが研究の目的である。HGFに関してはそのcDNAを中村敏一博士(大阪大学医学部、腫瘍医学部門、腫瘍生化学)より供与していただき、斉藤泉博士(東京大学医科学研究所、遺伝子解析センター)よりいただいたadenovirus vectorに組み入れ、HGFのadenovirus vector(AxHGF)を作成し、Hela細胞に遺伝子導入したところ、培養上清中に1000-3000ng/mlの濃度のHGFを検出し、その上清をヒト臍帯静脈内皮細胞に加えると内皮細胞に対する増殖効果がみられ、またラット肝細胞に対する活性酸素傷害の抑制効果もみられて、HGF遺伝子導入により産生されるHGFの活性を確認した。次に、293細胞でAxHGFを増殖させ、2回の塩化セシウム密度勾配超遠心法で濃縮し、Dimethylnitrosoamine(DMN)の腹腔内投与で作成した肝硬変ラットに投与したところ、肝障害に基づく線維化などの組織学的変化の改善、AST,ALTなどの肝逸脱酵素の低下、LDHの有意な低下がみられた。また、AxHGFを投与して3日目のラットに部分肝温虚血再潅流傷害を加えたところ、コントロール群に比べ、障害の減弱化が観察された。
脾摘後脾自家移植に対する効果をラットを用いて観察したが、血管新生の増加などは確認できず、実験法、評価法の再検討が必要と思われた。

研究成果

• [文献書誌] Yamaguchi M, et al.: "Continuous administration of prostaglandin E1 reduced hyperbilirubinemia after extended right lobectomy of liver"Can J Surg. 42. 149-150 (1999)
• [文献書誌] Yamaguchi M, et al.: "The Effect of flow on the neutrophil-mediated Ca2+ responses in human vascular endothelial cells stimulated by endotoxin"Surg Today. 29. 966-969 (1999)
• [文献書誌] Shimura H, Yamaguchi M, et al.: "Prevention of reactive oxygen-induced endothelial cell injury by blocking its process"Eur. Surg. Res.. 31. 390-398 (1999)
• [文献書誌] Sasaya S, Yamaguchi M, et al.: "Liver function could be assessed by increased rate of portal venous blood flow after oral intake of glucose"Eur J Surg. (in press.
• [文献書誌] Matsumoto T, Yamaguchi M, et al.: "Heparin reduced serum levels of endothelin-1 and hepatic ischemia reperfusion injury in rabbits"Surg Today. (in press.
• [文献書誌] Yamaguchi M, et al.: "Adenovirus-mediated insulin gene transfer improves nutritional and posthepatectomized conditions in diabetic rats"Surgery. (in press.