2001 年度研究成果報告書概要

脳腫瘍特異的抑制遺伝子のクローニング並びに機能解析と遺伝子治療の開発

研究課題

研究課題/領域番号	11671366
研究種目	基盤研究(C)
配分区分	補助金
応募区分	一般
研究分野	脳神経外科学
研究機関	京都大学
研究代表者	高橋潤京都大学, 医学研究科, 講師 (80252435)
研究分担者	上羽哲也京都大学, 医学研究科, 助手 (00314203)
研究期間 (年度)	1999 – 2001
キーワード	glioma / FGF-2
研究概要	目的:グリオーマの発生・増大の過程においてfibroblast growth factor-2(FGF-2)が重要な働きをしていると考えられており、その発現の調節のメカニズムを知ることを目的とする。方法と結果:Yeast-one-hybrid法を用いたスクリーニングにより、FGF-2のプロモーター領域に特定の蛋白が結合することを発見し、この蛋白のクローニングとその機能解析を行った。U87MGグリオーマ細胞にtetracycline-on systemを用いて同蛋白を強発現させたimmunocytochemistryの結果では、この蛋白が核および細胞質に存在することがわかった。Luciferase assayの結果では、同蛋白をtransfectしたU87MGとU251MGのグリオーマ細胞で、controlに比較してFGF-2のプロモーター活性が有意差をもって減少していることがわかった(P<0.05)。さらにlight cyclerを用いた定量PCR法により、同蛋白をU87MGグリオーマ細胞に強発現させることによりFGF-2のmRNAの発現量がcontrolに比べて10倍に減少していることが示された(P=0.0010)。結論:以上より、この特異的な蛋白がU87MGグリオーマ細胞において、転写因子として働きFGF-2の転写活性を抑制していることが示された。今後、実際の脳腫瘍細胞において同蛋白の発現レベルを調べ、臨床的悪性度との相関を調べていく方針である。