研究課題/領域番号 |
11671371
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研究機関 | 熊本大学 |
研究代表者 |
竹島 秀雄 熊本大学, 医学部, 助手 (70244134)
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研究分担者 |
生塩 之敬 熊本大学, 医学部, 教授 (20028583)
河内 正人 熊本大学, 医学部, 助教授 (70178218)
西 徹 熊本大学, 医学部・附属病院, 助手 (00264309)
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キーワード | NF2 / gene / promoter / cloning / luciferase / methylation |
研究概要 |
神経線維腫症2型(NF2)関連腫瘍においてNF2遺伝子の蛋白質コード領域に遺伝子変異の認められる頻度は約半数に過ぎない。これに対して、蛋白質発現の低下はほとんどの症例で共通して見られる。この矛盾点を説明し、NF2遺伝子の転写調節の異常が神経線維腫症2型における発癌機構に関わっている可能性を明らかにするために、本年度はNF2遺伝子のプロモーター領域のクローニングを行い、実際にどの部分が転写活性に重要であるかを決定した。まず、BACヒト遺伝子ライブラリーをスクリーニングし、NF2cDNAの第1エクソンにハイブリダイズする陽性クローンを単離した。DNAシークエンス解析により塩基配列を決定し、構造解析を行ったところNF2のプロモーター領域はTATAボックスを欠き、GC含量が高く、複数の転写開始点を有する典型的なハウスキーピング遺伝子プロモーターの特徴を有していた。次に、プロモーター領域の様々な欠失変異体を作成し、ルシフェラーゼ レポーターベクターに組み込み、ルシフェラーゼ ・アッセイにより転写調節に重要な部位を決定したところ、翻訳開始コドンより-616〜-550の約70bpの領域が必須であることがわかった。この領域内には、データベースの解析の結果、Sp1結合配列、Ets結合配列が存在した。そこで、ゲルシフトアッセイを行い、同領域内に転写因子が結合することを明らかにした。このDNA-蛋白質結合には70bpのほぼ大部分の領域が必要で、前述した転写因子の特異的競合配列では結合を阻害できなかった。以上のことより、70bpの領域には未知の蛋白質が結合していることが予想される。
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