| 研究課題/領域番号 |
11671607
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
小林 浩 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (40178330)
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| 研究分担者 |
鈴木 光明 自治医科大学, 医学部, 教授 (50110870)
大井 豪一 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (10283368)
西口 富三 浜松医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (30198452)
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| キーワード | 卵巣癌 / 遺伝子治療 |
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| 研究概要 |
(1) ヒト羊水および尿中に存在する生理的物質に癌浸潤抑制作用があることを発見し、Urinary trypsin inhibitor(UTI)と命名した。将来の遺伝子治療を目指しているが以下の結果を得た。(2)UTI誘導体ATF-HI-8の作成:UTIは直接癌細胞に結合するが親和性は必ずしも高くない。そこで、UTIを癌細胞に特異的に集積させるためにUTI改変体(ATFHI-8)を遺伝子工学的に大腸菌により作成した。UTIおよびATF-HI-8cDNAの各種プライマーを作成し、PCRによる増幅を行い、発現ベクターに組み込み大腸菌に発現させ、リコンビナント蛋白質として大量精製し、癌浸潤抑制実験、担癌動物実験に使用した。その結果はATF-HI-8のほうがUTIより10倍強力な転移抑制作用を示した。ATFHI-8の安全性、毒性等の比較試験を行っている。(3)ヒト卵巣癌細胞HRAにUTI遺伝子を導入し安定したクローンを得た。これを用いてin vitro invasion assayを行ったところHRA親株に比べて明らかに浸潤能が抑制されていた。(4)また、同様にこれらのクローンを導入した株におけるin vivo dissemination assayを行っている。ヌードマウス腹膣内にHRA親株およびクローンを移植し、癌性腹膜炎を発症させ、腹膜播種の程度および生存期間について検討したところ、明らかに腹膜播種した腫瘍の重量および生存期間の延長を確認することができた。(5) UTIの作用機序解明:UTIを標識した後、癌細胞に作用させた後の取り込み実験を行い、UTIが癌細胞からのウロキナーゼ発現を抑制する機序をノーザンブロットおよびウエスタンブロットによりmRNAおよび蛋白質の変化を測定する。同時に細胞内シグナル伝達について検討しているところである。(6)UTIおよびその誘導体の遺伝子導入:各種ベクターを癌細胞に導入し強発現癌細胞を選択し、安定発現株を樹立する。安定的発現をフローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ザイモグラフィー、免疫沈降法、免疫染色法により確認している。
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