| 研究概要 |
発情期の雌C57BL/6NJc1マウスと雄マウスを一晩同一飼育箱で飼育し,翌朝,膣栓のみられた雌を妊娠0日とした.妊娠10日から出生直前の妊娠18日のいずれかの日に,母獣マウスを屠殺・開腹して,胎仔を取り出した.実体顕微鏡下で外形観察ののち眼部のみの組織片として,4%パラフォルムアルデヒド液に直ちに浸漬・固定した.約1週間浸漬・固定後,エタノール系列で脱水,キシレンで透徹後,パラフィンに包埋し,厚さ4μmで薄切して,眼部の連続切片を作成した.脱パラフィン,水和ののち,組織切片中のアポトーシス検出にはterminal transferase-mediated deoxyuridinetriphosphate(d-UTP)-biotin nick-end labeling(TUNEL)法を用いた.その後,核の対比染色として,ヘマトキシリン染色あるいはメチルグリーン染色を施した.すべての染色した切片は,光学顕微鏡で詳細に観察した.必要に応じて,光学顕微鏡で各染色切片の写真撮影を行うことで,結果を客観的に記録した.水晶体の初期正常発生過程において,アポトーシスによる細胞死は,水晶体板の水晶体窩・水晶体胞への陥入,水晶体茎の退縮,水晶体胞腔内のepitrichial cellの消失に関与していることを解明した.
臨床的には,眼先天異常の一つである定型的コロボーマの72例を検討し,その合併眼異常,,および,全身異常の見地から定型的コロボーマが神経堤細胞の発生異常で惹起されることを報告した.
今後,マウスを用いて眼正常発生ならびに眼先天異常の成立過程を,プログラムされた細胞死(アポトーシス)の面からさらに解明する予定である.
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