| 研究課題/領域番号 |
11671841
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
服部 高子 岡山大学, 歯学部, 助手 (00228488)
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| 研究分担者 |
大山 和美 岡山大学, 歯学部, 教務員 (00253021)
中西 徹 岡山大学, 歯学部, 助教授 (30243463)
滝川 正春 岡山大学, 歯学部, 教授 (20112063)
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| キーワード | CTGF / 軟骨細胞 / 遺伝子発現 / 非翻訳領域 / シスエレメント |
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| 研究概要 |
A.ゲノムレベルでの発現修飾の検証-現在までに得られているエコジェニン/CTGF遺伝子の塩基配列情報は、主として非翻訳領域のものである。それらデータに関する限り、軟骨細胞株HCS-2/8細胞のCTGF遺伝子塩基配列は、コントロールのHeLa細胞などと90%以上の一致を見ており、今のところ遺伝子発現に影響の疑われる修飾は見つかっていない。
B.転写レベルでの研究-エコジェニン/CTGFプロモーター全域を転写装置として持ち、蛍ルシファラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子とする基本コンストラクトに加え、我々はさらに5種、プロモータに欠損変異を持つ誘導体プラスミドを構築し、CTGFプロモーター活性の評価に利用している。その結果ある種の細胞においては、糖質コルチコイドであるデキサメタゾンや、ヒトT細胞白血病ウイルスI型の発癌遺伝子産物である、Taxタンパク質によってCTGFプロモーターが活性化される事実を見い出した。この効果は細胞種に強く依存しており、病因論的意義に加えて特定の転写因子の介在を伺わせる点でも興味を引く。
C.転写後レベルにおける研究-現在最も具体的成果の得られつつある研究テーマである。我々は全長約1kbのエコジェニン/CTGF遺伝子3'-非翻訳領域(3'-UTR)を蛍ルシファラーゼ遺伝子下流に直結し、キメラ遺伝子として発現、定量比較することで、3'-UTRの持つ強力な遺伝子発現抑制作用を発見した。この抑制効果は、Cos-7、HeLa、NIH3T3、そして軟骨細胞株HCS-2/8細胞においても共通して見られるため、CTGFの遺伝子発現抑制の維持に一定の役割を持っていることに疑いはない。同3'-UTRによる遺伝子発現抑制効果は、レポータ遺伝子に対し順、逆方向に接続した場合両方において認められたが、3'-UTR欠損変異体を用いた解析では、順、逆方向それぞれに別々のエレメントがそれぞれ関与しているとの所見が得られた。現在、その詳細な分析を続けているところである。
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