胆汁酸生合成関連酵素の基質特異性ならびに反応の立体化学的特異性の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11672152
• 研究機関: 北海道医療大学
• 研究代表者: 黒澤 隆夫 北海道医療大学, 薬学部, 教授 (50103198)
• 研究分担者: 村井 毅 北海道医療大学, 薬学部, 助手 (50260823) ; 吉村 昭毅 北海道医療大学, 薬学部, 講師 (60220737)
• キーワード: 胆汁酸生合成 / C27-胆汁酸 / 胆汁酸CoAエステル / 高速液体クロマトグラフィー / GC / MS / ペルオキシゾーム / bifunctional enzyme

研究概要

胆汁酸生合成における側鎖開裂反応(β-酸化)には肝ペルオキシソーム内に存在するacyl CoA oxidase enoyl CoA hydratase/dehydrogenase(bifunctional enzyme)及び3-oxoacyl CoA thiolaseが関与するが,昨年度に引き続き,これら各酵素の基質にそれぞれ対応する胆汁酸生合成中間体CoAエステルを化学合成した。特に今年度はSterol Carrier Protein X(3-oxo-acyl-CoA thilase)の基質となる3α,7α,12α-trihydroxy-及び3α,7α-dihydroxy-24-oxo-5β-cholestan-26-oic acid CoA esterの化学合成を達成することができ,胆汁酸研究会においてその成果を報告した.
次いで、bifunctional enzymeの基質である3α,7α,12α-trihydroxy-及び3α,7α-dihydroxy-5β-cholestan-26-oic acid CoA ester,3α,7α,12α,24-tetrahydroxy-及び3α,7α,24-trihydroxy-5β-cholestan-26-oic acid CoA esterの合成を行い,前年度に確立した高速液体クロマトグラフィーによる分析法を用いて,これらを基質としたbifunctional proteinの反応性及び特異性について検討した.
さらに各種体液中に存在する生合成中間体の分析に適したGC/MSによるC27-胆汁酸の微量一斉分析法の開発を行い,生体試料中(特に胆汁酸代謝異常症患者)の胆汁酸生合成中間体の分析も検討した。

研究成果

• [文献書誌] Kobayashi M.: "3β-Hydroxy-△5-C27-steroid dehydrogenase/isomerase deficiency in a 23-year-old woman"Pedatrics International. 42. 685-688 (2000)
• [文献書誌] Hui S-P.: "Determination of Regioisomeric Hydroperoxide of Fatty Acid Cholesterol Esters Produced by Photosynsetized Peroxidation Using HPLC"Anal.Sci.. 16. 1023-1028 (2000)
• [文献書誌] Bun-ya M.: "Metabolic Significance and expression of Caenorhabdas elegans Type II 3-oxoacyl-CoA Thiolase"Cell Biol.Biophys.. 32. 291-293 (2000)
• [文献書誌] 木村昭彦: "尿中胆汁酸分析による胆汁酸異常症の診断"日本小児科学会雑誌. 104. 686-687 (2000)
• [文献書誌] Kurosawa T.: "Synthesis of Coenzyme A esters of 3α,7α,12α-trihydroxy- and 3α,7α-dihydroxy-24-oxo-5β-cholestan-"Steroids. 66. 499-504 (2001)
• [文献書誌] Kurosawa T.: "Conjugation reactions catalyzed by bifunctional proteins related to β-oxifdation in bile acid biosynthesis"Steroids. 66. 107-114 (2001)