|
出血性蛇毒であるガラガラ蛇の毒素からアポトーシス誘導因子Apoxin 1を精製した。生成したApoxin 1のN末アミノ酸配列の解析からApoxin 1はLアミノ酸オキシダーゼと相同性が高いことが示され、実際精製Apoxin 1がLアミノ酸オキシダーゼ活性を持つことが明らかになった。CatalaseやTrolox等の活性酸素消去剤を用いた検討から、Apoxin 1はLアミノ酸を酸化し、その結果生じた過酸化水素が細胞に傷害を与えアポトーシスを誘導することが明らかになった。精製Apoxin 1をリジルエンドペプチダーゼで消化して得られたペプチド断片のアミノ酸配列を決定し、この配列をもとに縮重プライマーを合成して、PCR法により蛇毒腺細胞のcDNAライブラリーからApoxin 1の全長cDNAをクローニングした。cDNA塩基配列の結果からApoxin 1はフラビン結合ドメインとADP結合ドメインを持ち、L-アミノ酸の酸化にFADを補酵素として必要とすることが示唆された。Apoxin 1のcDNAを真核細胞に導入して発現を試みたところ、組み替え蛋白質が細胞内に蓄積し、一部は培養液中に分泌された。細胞内に蓄積しているApoxin 1は不活性であり、培養上清中に分泌されてきたApoxin 1がL-アミノ酸オキシダーゼ活性及びアポトーシス誘導活性を持つことがわかった。また活性なApoxin 1分子を生合成するためには糖鎖による修飾が必要であった。これらの結果から、Apoxin 1の活性は細胞内では抑制されており、分泌される過程で糖鎖などの修飾を受けて活性化される可能性が考えられた。
|
