酸化LDL中の活性因子である酸化リン脂質の生体内での生成と代謝

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11672184
• 研究機関: 帝京大学
• 研究代表者: 板部 洋之 帝京大学, 薬学部, 助教授 (30203079)
• キーワード: 酸化LDL / 酸化PC / HPLC / モノクローナル抗体 / 動脈硬化 / 微小酸化LDL

研究概要

動脈硬化の発症要因としてLDLの酸化変性の重要性は共通認識となっているが、生体内での酸化LDLの挙動と動脈硬化発症に関わる分子機構はよく分かっていない。その一因は、酸化LDL自体の構造分析が困難で、種々生物活性の本体が明らかにできないことにある。
我々はこれまでに、PCの過酸化反応生成物(酸化PC)を認識するモノクローナル抗体を利用して、酸化PCが酸化LDL上に生じること、それが動脈硬化病巣の泡沫細胞内に局在すること、さらにマクロファージに認識される可能性を見出し、これらの結果を踏まえて酸化PC分子が動脈硬化発症の一つの鍵であることを想定している。本年度は、1,4-ヘキサンジオンを用いた簡便な反応系でアルデヒド型酸化PCを蛍光誘導体にした後、HPLCによる高感度検出系を導入し、酸化LDL中の遊離型酸化PCの定量を可能にした。
近年、非常に緩和な酸化条件で調製した微少酸化LDL(MM-LDL)が、より生体内の酸化LDLを反映するモデルとなる可能性が指摘されている。そこで、異なる条件下で調製し酸化反応の程度の異なる種々酸化LDLの性状を多角的に比較検討した。遊離型の酸化PCは蛍光誘導体として定量し、またapoB蛋白質に結合した複合体型酸化PCは、抗体を用いたサンドイッチELISA法で定量した。従来報告されているように、CuSO4添加、37℃で反応させた酸化LDLに比べ、FeSO4添加、4℃で反応させるMM-LDLは、TBARSやアガロースゲル電気泳動度で見られるような粒子全体の酸化変性度はわずかであった。一方、酸化PCの生成量やapoB複合体型酸化PCの生成量は同等かむしろMM-LDLの方が高いことが、これまでの検討で示唆された。目下、このような酸化LDLの性状の差と、内皮細胞やマクロファージへの作用との関連を検討することが急務である。この結果は、酸化LDL中の機能分子としての酸化PCの寄与を明らかにする新たな糸口を得たものと期待している。

研究成果

• [文献書誌] Miyazaki,H., et al.: "Hemodialysis impairs endothelial function via oxidative stress. Effects of vitamin E-coated dialyzer."Circulation. 101. 1002-1006 (2000)
• [文献書誌] Imanaga,Y., et al.: "In vivo and in vitro evidence for glycoxidation of low density lipoprotein in atherosclerotic plaques."Atherosclerosis. 153. 343-355 (2000)
• [文献書誌] Kohno,H., et al.: "Simple and pactical sandwich-type enzyme immunoassay for human oxidatively modified low density lipoprotein using antioxidized phosphatidylcholine monoclonal antibody and antihuman apolipoprotein-B antibody."Clin.Biochem.. 33. 243-253 (2000)
• [文献書誌] Ryu,A., et al.: "Enhanced degradation of phospholipids by phospholipase A2 in liver of carbon tetrachloride-treated rat."J.Health Chem.. 46. 275-281 (2000)
• [文献書誌] Naba,I., et al.: "Successful generation of peripheral neuropathy with onion-bulb formation in the scavenger receptor class A knockout mouse treated with isoniazid."Neurosci.lett.. 290. 5-8 (2000)
• [文献書誌] Itabe,H., et al.: "Preparation of radioactive aldehyde-containing phosphatidylcholine."Anal.Biochem.. 285. 151-155 (2000)
• [文献書誌] Itabe,H., et al.: "Lysosomal accumulation of oxidized phosphatidylcholine-apolipoprotein B complex in macrophages : Intracellular fate of oxidized low density lipoprotein."Biochim.Biophys.Acta. 1485. 233-245 (2000)
• [文献書誌] Toshima,S., et al.: "Circulation oxidized modified low density lipoprotein levels : A biochemical risk marker for coronary heart disease."Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.. 20. 2243-2247 (2000)
• [文献書誌] Fukasawa,M., et al.: "Reduction of sphingomyelin level without accumulation of ceramide in Chinese hamster ovary cells affects detergent-resistant membrane domains and enhances cellular cholesterol efflux to methyl-β-cyclodextrin."J.Biol.Chem.. 275. 34028-34034 (2000)
• [文献書誌] Okura,Y., et al.: "Oxidized low density lipoprotein is associated with apoptosis of vascular smooth muscle cells in human atherosclerotic plaques."Circulation. 102. 2080-2086 (2000)
• [文献書誌] Naba,I., et al.: "Onion-bulb formation after a single compression injury in the macrophage scavenger receptor knockout mice."Exp.Neurol.. 199. 83-89 (2000)
• [文献書誌] Ehara,S., et al.: "Oxidized low density lipoprotein relates to plaque destabilization in human coronary atherosclerotic lesions."Circulation. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] Ishikawa,K., et al.: "Heme oxygenase-1 inhibits atherosclerotic lesion formation in LDL receptor knockout mice."Circ.Res.. (印刷中). (2000)
• [文献書誌] 板部洋之: "リポタンパク代謝と動脈硬化"日本油化学会誌. 49. 687-694 (2000)
• [文献書誌] Itabe,H.and Takano,T.: "Oxidized low density lipoprotein : The occurrence and metabolism in circulation and in foam cells."J.Atheroscler.Thromb.. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] 板部洋之: "酸化LDL中のリン脂質とその意義"動脈硬化. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] 板部洋之,高野達哉: "血漿脂質およびリポタンパク質の構造・機能・代謝"日本臨床. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] 板部洋之 他(計92名): "「脂質・糖質・複合脂質」(基礎生化学実験法 第5巻、日本生化学会 編)"東京化学同人. 338 (2000)