| 研究課題/領域番号 |
11672196
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| 研究機関 | 名城大学 |
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研究代表者 |
金田 典雄 名城大学, 薬学部, 教授 (00144139)
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| 研究分担者 |
疋田 清美 名城大学, 薬学部, 助手 (30257654)
村田 富保 名城大学, 薬学部, 助手 (80285189)
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| キーワード | 副腎髄質細胞 / トランスジェニックマウス / パーキンソン病 |
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| 研究概要 |
パーキンソン病は中脳黒質から線条体に投射するドパミン神経の選択的な変性、脱落に伴うドパミン代謝異常であるが、この選択的細胞死のメカニズムを明らかにするためには黒質ドパミン神経の表現型を保持した細胞株の樹立が極めて重要である。黒質のドパミン神経は数も少なくこれを特異的に株化することは一般に困難であるが、本研究ではドパミン神経細胞特異的な遺伝子プロモーターと細胞を不死化させるための癌遺伝子の発現を組み合わせた発生工学的手法による神経細胞の株化を試みている。
これまでにヒトチロシン水酸化酵素(TH)遺伝子プロモーター領域2.5kbに癌遺伝子であるSV40T抗原温度感受性変異株の遺伝子を連結したDNAを導入したトランスジェニック(Tg)マウスを作製しているが、このTgマウスは数カ月以内に副腎に腫瘍を形成することを見出している。また、このTgマウスでは胎仔の中脳腹側部と成体の副腎髄質部において、THタンパク質とSV40T抗原を共発現していることが認められた。
平成12年度は、腫瘍化した副腎髄質部から細胞を単離し、培養するための条件を検討した。組織をトリプシンで消化し、細胞分散液を調製し、コラーゲンコートしたプラスチックディッシュにまき、33℃で培養をつづけ、数個のクローンを単離した。細胞のカテコールアミン含量から、これらの細胞はドパミンを主に合成・分泌するものと、ノルエピネフリンを主に合成・分泌するものに分かれることを見出した。さらにこれらの細胞はある種の因子の存在下で39℃で培養すると、細胞の生存・維持活性を高めるだけでなく、多数の突起を形成することを見出した。
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