HCV感染HCV感染に伴い増加するB細胞クローンと補体寒冷活性化を起こすRFのV領域の構造

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11672313
• 研究機関: 大阪医科大学
• 研究代表者: 清水 章 大阪医科大学, 医学部, 教授 (00028581)
• 研究分担者: 中西 豊文 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10247843) ; 中川 俊正 大阪医科大学, 医学部, 助教授 (30237226)
• キーワード: 補体 / HCV / RF / 免疫グロブリンV領域 / 質量分析 / 低温補体活性化現象 / cold activation / プロテオミクス

研究概要

寒冷補体活性化現象(cold activation)は1970年代、研究代表者所属教室の前任教授稲井真弥らによって、発見された現象である。稲井らはnon-Anon-B肝炎の患者にcold activationを示す患者が多いことを発見し、研究代表者らはこれら患者が、後に発見されたHCV感染を受けていることを示した。さらに血清を低温に放置するとRFの値が上昇する検体を発見し、それらが、同時に、cold activationを起こす症例であり、またHCV陽性であることを示した。これらは低温でのみ反応するのでアフィニテイーの低いIgM RFの可能性がある。生殖細胞型V領域遺伝子或いは体細胞突然変異頻度の低いV領域遺伝子の配列によってコードされた構造をもつ可能性がある。近年著しい進歩を遂げたタンパク質、遺伝子分析技術を応用して、この作業仮説を証明することが本研究の目的である。
CA陽性血清より分離したIgMのV領域の構造を調べること、CA陽性症例Bリンパ球のm-RNAの構造分析を計画した。血清を等電点電気泳動とSDSポリアクリルアミド電気泳動で2次元に展開した。プロテオミクスの手法により、それぞれのスポットを切り抜き、これに還元アルキル化剤を加え、ゲル中のタンパク質をアルキル化した後、トリプシンを加える。消化後溶媒抽出し、抽出物をエレクトロスプレー質量分析により、分析し、アミノ酸配列を調べた。多種類のV領域アミノ酸配列を同定した。MDMRVPAQLLGLLLLR (Igκlight chain 1-16) ASQSISSYLNWYQQKPGKAPK (Igκ light chain 47-67) DSTYSLSSTLTLSK (Igκlight chain 55-68)これらペプチドは変異部位の中で変異の少ない部分と考えられる。安定同位体標識ペプチドを比較物質として定量する条件の検討を始めた。

研究成果

• [文献書誌] Nakagawa T.Ikemoto.Takeuchi T.Shimizu A: "Eosinophilic peroxidase deficiency : identification of a point mutation (D648N) and prediction of structural changes"Human Mutation. 17・3. 235-236 (2001)
• [文献書誌] Fukada K.Nagano S, Satoh M.Tohyama C.Nakanishi T.Shimizu A: "Stability of mutant SOD1 protien by co-expressed wild SOD1 protein causes disease acceleration in familial amyotrophic lateral sclerosis model mouse"Eur J. Neuroscience. 14・12. 2032-2036 (2001)
• [文献書誌] Shimizu A.Nakanishi T.Koyama R.Ikeda T: "Proteomics in Clinical Research : new approach of Mass spectrometry"Rinsyo Byori. 50・2. 169-172 (2002)
• [文献書誌] Nakanishi T.Koyama R.Ilkeda T.Shimizu A: "Catalogue of soluble proteins in the human vitreous humor : comparison between diabetic retinopathy and macular hole"J. Chromatography B. (in press). (2002)
• [文献書誌] Shimizu A, Nakanishi T.Kishikawa M.Miyazaki A: "Detection and identification of protein variants and adducts in blood and tissues : an application of soft ionization mass spectrometrv to clinical diagnosis"J. Chromatography B. (in press). (2002)
• [文献書誌] Nakanishi T.Miyazaki A.Shimizu A.Yamaguchi A.Nishimura S: "Assessment of the effect of hemoglobin variants on routine HbA1c measurements by electrospray ionization mass spectrometry"Clinica Chimica Acta. (in press). (2002)
• [文献書誌] Shimizu A, Nakanishi T, Miyazaki A: "Advances in Mass Spectrometry"Determination of an accurate ratio of a peptide and its adduct by ESIMS : Calculation of the weighted sum of singly and doubly charged ion intensity. 984 (2001)