| 研究課題/領域番号 |
11680607
|
|---|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
唐渡 孝枝 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助教授 (60108876)
|
|---|
| 研究分担者 |
井上 雅広 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助手 (00232562)
木戸 博 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (50144978)
|
|---|
| キーワード | Cathepsin J / Cathepsin C / リソゾ-ム / システイン / プロテアーゼ / Asn結合型糖鎖 / プロ鎖ペプチド |
|---|
| 研究概要 |
Cathepsin J(C)は細胞障害性及び骨髄性細胞に、高いレベルで発現し、これらの細胞の顆粒内に局在するSerine proteaseの活性化に関与していることから、阻害剤の開発と創薬の観点から、特に注目されている。この研究はCathepsin J(C)の構造と機能相関を解明することを目的としている。1)プロ鎖、成熟型重鎖、軽鎖ペプチドの分離-精製ラットCathepsin J(C)をCM化し、逆相HPLCを行って、プロ鎖、成熟型重鎖及び軽鎖ペプチドを分離した。2)Endoglycosidase処理による糖鎖構造の推定-Cathepsin J(C)のcDNAから、プロ鎖に3ヶ所、成熟型酵素に1ヶ所のAsn結合型糖鎖結合部位のあることが推定された。そこで各々のペプチドについて、Glycopeptidase F(GPF)及びEndo H処理、SDS-PAGEを行った。プロ鎖(20-24kDa,18kDa)の場合、両酵素処理で15kDaと11kDaのバンドにシフトした。N末アミノ酸配列分析及びゲルシフトから、24kDaのバンドはAsn結合型糖鎖が3本、18kDaには2本付加していると考えられ、これらの糖鎖はEndo H感受性であることから、いずれもハイマンノース型と推定された。成熟型酵素の重鎖(24kDa)の場合、GPF処理で21kDaのシフトし、Endo H処理抵抗性糖鎖が多くを占め、21kDaにシフトしたのはわずかであった。このゲルシフト、N末アミノ酸配列分析から、重鎖にはcDNAから推定されたようにAsn結合型糖鎖の付加には1ヶ所でコンプレックス型糖鎖が主であることが示唆され、同様な処理で軽鎖には糖鎖付加は認められなかった。これらのデータをもとに糖鎖のピリジルアミノ化法にて詳細な糖鎖構造の解析を進めている。
|
