| 研究課題/領域番号 |
11680607
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
唐渡 孝枝 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助教授 (60108876)
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| 研究分担者 |
井上 雅広 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助手 (00232562)
木戸 博 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (50144978)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| キーワード | カテプシンJ / カテプシンC / リソゾーム / ハイマンノース型 / コンプレックス型 / プロペプチド / 気道 |
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| 研究概要 |
この研究はCathepsin J(C)の構造と機能相関を解明することを目的としている。Cathepsin J(C)はPreprocathepsin J(C)として生合成され、その後プロセシングを受けて、成熟型Cathepsin J(C)となる。我々によって完全精製したCathepsin J(C)は成熟部位を構成する重鎖と軽鎖以外にPro鎖の一部を含み、各々4量体から成るオリゴメリックな構造をしている。我々は主なPro鎖断片、20-24kDaと18kDaは15kDaと11kDaのペプチドに、各々糖鎖が3本と2本付加しているPro鎖断片であることを明らかにした。また、重鎖に糖鎖が1本付加していて、軽鎖には認められなかった。これらの付加糖鎖のうち、Pro鎖断片の糖鎖はEndo Hに感受性が高くハイマンノース型と推定され、重鎖のそれはEndo H抵抗性糖鎖が多くを占めていたことから、コンプレックス型が主であることが明らかになった。そこで、ピリジルアミノ(PA)化法による詳細な糖鎖構造の解析を行い、次のことが明らかになった。約40%はマンノース4-7ヶのハイマンノース型糖鎖であり、シアル酸まで揃ったコンプレックス型の2本鎖は約13%で、このほとんどはリソゾーム酵素によって部分的に分解されたものである。約7%を占めるマンノース3ヶから成る糖鎖はリソゾームのマンノシダーゼの基質特異性から、ハイマンノース型由来とは考え難く、コンプレックス型由来とみなされる。そしてハイブリット型糖鎖も若干認められた。以上の結果は、Cathepsin J(C)はPro鎖が内側に成熟酵素の重鎖が外側に向くような形でオリゴマー構造を保っていて、Pro鎖の糖鎖はリソゾーム酵素に比較的さらされ難い状態にあり、重鎖の糖鎖はリソゾーム酵素によく曝された状態にあることを示している。
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