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2000 年度 研究成果報告書概要

エンハンサー-プロモーター間相互作用「橋渡し分子」群の赤血球分化における機能

研究課題

研究課題/領域番号 11680670
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 分子生物学
研究機関筑波大学

研究代表者

小林 麻己人  筑波大学, 基礎医学系, 講師 (50254941)

研究分担者 山本 雅之  筑波大学, 基礎医学系, 教授 (50166823)
研究期間 (年度) 1999 – 2000
キーワードゼブラフィッシュ / GATA-1 / 赤血球分化 / 転写制御 / GFP / トランスジェニックフィッシュ / 正のフィードバック機構
研究概要

赤血球分化に必須な転写因子GATA-1は、種々因子とさまざまな「橋渡し分子」複合体を形成することにより、複数の機能を発揮していると予想される。本研究では、GATA-1の標的遺伝子候補であるGATA-1遺伝子自身の転写制御領域を鋳型として用い、ゼブラフィッシュ胚に対する生体レポーター解析を行うことにより、生理的な条件下で活性をもつGATA-1「橋渡し分子」複合体の作用機序と分子的実体の解明を試みた。
まず、ゼブラフィッシュGATA-1ゲノム遺伝子を単離同定し、その翻訳開始点上流8kbにGFP遺伝子をレポーターとして接続したコンストラクトを構築した。この構築をゼブラフィッシュ胚に注入したところ、内因性のGATA-1発現を再現するGFP発光を示したので、この構築をゲノムに安定に組み込んだトランスジェニックフィッシュの系列を作製した。次に、このGATA-1-GFPレポーターフィッシュ胚に対して、GATA-1の過剰発現を行なった結果、体節期において異所的なGFPの発現誘導が観察された。種々の変異GFPレポーター構築を用いた結果、このGFP発現誘導には、翻訳開始点上流約6kbに存在するGATA配列が重要であることがわかった。このことはGATA-1遺伝子の発現における正のフィードバック機構の存在を示唆するとともに、GATA-1遺伝子がGATA-1の直接の標的遺伝子であることを個体レベルで初めて示すものとなった。このGFP発現誘導に必要なGATA-1蛋白質ドメインを明らかにするために、種々の変異GATA-1構築を準備し、過剰発現解析を行なった結果、GFP誘導には2つのZnフィンガーがともに必要であることがわかった。N末側のZnフィンガーは、FOGなどの因子と相互作用することが報告されており、他の因子との相互作用の必要性が示唆された。

  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] Kobayashi,M.: "Expression of three zebrafish Six4 genes in the cranial sensory placodes and the developing somites."Mech.Dev.. 98. 151-155 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kobayashi,M.: "The homeobox protein Six3 interacts with the Groucho corepressor and acts as a transcriptional repressor in eye and forebrain."Dev.Biol.. (印刷中). (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kajihara,M.: "Isolation, characterization, and expression analysis of zebrafish large Mafs."J.Biochem.. 129. 139-146 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Motohashi,H.: "Positive or negative MARE-dependent transcriptional regulation is determined by the abundance of small maf proteins."Cell. 103. 865-875 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Katsuoka,F.: "One enhancer mediates mafK transcriptional activation in both hematopoietic and cardiac muscle cells."EMBO J.. 19. 2980-2991 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Nishimura,S.: "A GATA box in the GATA-1 gene hematopoietic enhancer is a critical element in the network of GATA factors and sites that regulate this gene."Mol.Cell.Biol.. 20. 713-723 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kobayashi, M.: "Expression of three zebrafish Six4 genes in the cranial sensory placodes and the developing somites."Mech.Dev.. 98. 151-155 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kobayashi, M.: "The homeobox protein Six3 interacts with the Groucho corepressor and acts as a transcriptional repressor in eye and forebrain."Dev.Biol.. (in press). (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kajihara, M.: "Isolation, characterization, and expression analysis of zebrafish large Mafs."J.Biochem.. 129. 139-146 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Motohashi, H.: "Positive or negative MARE-dependent transcriptional regulation is determined by the abundance of small maf proteins."Cell. 103. 865-875 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Katsuoka, F.: "One enhancer mediates mafK transcriptional activation in both hematopoietic and cardiac muscle cells."EMBO J.. 19. 2980-2991 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Nishimura, S.: "A GATA box in the GATA-1 gene hematopoietic enhancer is a critical element in the network of GATA factors and sites that regulate this gene."Mol.Cell.Biol.. 20. 713-723 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2002-03-26  

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