アルツハイマー病に見られる神経細胞変性におけるtauタンパク質の役割の解明

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11680746
• 研究機関: 理化学研究所
• 研究代表者: 村山 洋 理化学研究所, アルツハイマー病研究チーム, 研究員 (20301781)
• キーワード: アルツハイマー病 / 神経原繊維変化 / タウタンパク質 / Yeast Two-hybrid

研究概要

神経原線維変化にみられるNeurofibrilary tangle(NFT)の主要構成成分であるタウ-タンパク質のアルツハイマー病における役割を解明することを目的として、yeast two-hybrid systemによるタウ-タンパク質に対する結合タンパク質の検索を試みた。タウ(4リピート・タウ)をコードするcDNAを挿入したGAL4 DNA-BD発現ベクターpAS2-1を酵母CG1945に導入し、標的タンパク質(BD-タウ融合蛋白)発現酵母CG1945/tauを作製した。タウ-タンパク質の発現をウェスタンブロットにより確認した酵母クローンを結合タンパク質のスクリーニングに用いた。CG1945/tauにGAL4AD発現ベクターpACT2で構築されたヒト脳cDNAライブラリーを導入後、Trp(-)/Leu(-)/His(-)選択培地に播種した。得られたコロニー(ポジティブクローン)、からプラスミドDNAを調製し導入されたcDNAの塩基配列を決定し結合タンパク質のアミノ酸配列を推定した。同様なスクリーニングを2回行い、重複して得られたクローンが2種類得られ、1種類(Tw2.13)について培養細胞{(COS7細胞)を用いてタウタンパク質との相互作用を検討した。Tw2.13とタウタンパク質をCOS7に共発現させ免疫沈降法及び免疫染色で検討した結果、Tw2,13・とタウタンパク質が細胞質内で結合していることが確認された。また、Tw2.13に対するタウタンパク質の影響を検討するためタウタンパク質の種々の欠失変異とTw2.13を共発現させたところ微小管結合ドメインを欠失した変異タウタンパク質によってTw2.13の量が減少することが観察された。以上の結果は、Tw2.13のタンパク質レベルをタウが調節している可能性を示唆している。現在、Tw2.13の関わる細胞内シグナル伝達系を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Takashima A.,Honda T.et al.: "Activation of tau protein kinase I/glycogen synthase kinase-3β by"Neurosci.Res.. 31. 317-323 (1998)
• [文献書誌] Honda T.,Yasutake K.et al.: "Dual roles of proteasome in the metabolism of presenilin 1"J.Neurochem.. 72. 255-261 (1999)
• [文献書誌] Murayama O.,Tomita T.et al.: "Enhancement of amyloid β42 secretion by 28 different presenilin 1"Neurosci.Lett.. 265. 61-63 (1999)
• [文献書誌] Murayama O.,Murayama M.et al.: "Twenty-nine missense mutations linked with familial Alzheimer's"Prog.Neuro-Psychopharmacol. & Biol. Psychiat.. 23. 905-913 (1999)
• [文献書誌] Katayama T.,Imaizumi K.et al.: "Presenilin-1 mutations downregulate the signalling pathway of"Nature Cell Biol.. 1. 479-485 (1999)
• [文献書誌] Honda T.,Nihonmatsu N.et al.: "Familial alzheimer's disease-associated mutations block translocation"Neurosci.Res.. (in press).