抗血管内皮増殖因子リボザイムによるヒト膵癌肝転移遺伝子治療モデル

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11680825
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 上山 義人 東海大学, 医学部, 助教授 (30072408)
• 研究分担者: 中村 雅登 東海大学, 医学部, 助教授 (00164335)
• キーワード: リボザイム / 血管内皮増殖因子 / 膵癌 / アイソフォーム / 遠隔転移 / 遺伝子治療モデル / 血管新生

研究概要

本研究はヒト膵癌の増殖・進展、特に遠隔転移におけるVEGF189の機能をヒト癌-免疫不全動物移植/肝転移モデル(ヒト膵癌肝転移モデル)において解析した。VEGF189のmRNAを特異的に分解するリボザイムを用い、実際にヒト膵癌の肝転移を免疫不全動物マウス個体内で阻害・予防できるか否かを検討した。平成12年度はVEGF189を分解するリボザイムを組み込んだ膵癌培養細胞MIAPaca-2の細胞生物学的特性をin vivo実験動物系を利用して解析するとともに、RT-PCR・シークエンス解析でリボザイムの導入を確認し(MIA Paca-2/VR)、同定されたリボザイム導入細胞株を用いて細胞生物学的解析を行った。細胞関連型VEGF189の発現の確認された膵癌株を用い、in vitroで分解活性の確認されたリボザイムをベクターpHβに組み込む(pHβ/V189Rz,pHβ/dis-V189Rz)をリポフェクションにより遺伝子導入した。RT-PCR・シークエンス解析でリボザイムの導入を確認し(MIA Paca-2/VR)、同定されたリボザイム導入細胞株を用いて細胞生物学的解析を行った。また、リボザイム導入ヒト膵癌株(MIA PaCa-2/VR)とHUVECをco-cultureし血管内皮細胞の活性指標である組織プラスミノーゲン活性化因子(tissue plasminogen activator,TPA)を測定した。さらに、in vitroで分解活性の確認されたリボザイム/ベクター(pHβ/V189Rz,pHβ/dis-V189Rz)をリポフェクションにより遺伝子導入したヒト膵癌培養細胞株を免疫不全マウス(ヌードマウス、SCIDマウス)の皮下、脾門部(門脈)に移植し、増殖性、肝転移能を実験動物学的に解析した。

研究成果

• [文献書誌] H.Osada,Y.Ueyama, et.al.: "Gene expression of angiogenesis related factors in glioma"International Journal of Oncology. 18. 305-306 (2001)
• [文献書誌] Y.Oshika,Y.Ueyama, et al.: "Ribozyme approach to downregulate vacular endoethelial growth factor (VEGF)189 expression in non-small cell lung cancer (NSCLC)"European Journal of Cancer. 36(18). 2390-2396 (2000)
• [文献書誌] T.Tokunaga,Y.Ueyama, et.al.: "Ribozyme mediated inactivation of mutant K-ras oncogene in a colon cancer cell line"British Journal of Cancer. 83(6). 833-839 (2000)
• [文献書誌] H.Hatanaka,Y.Ueyama, et.al.: "Clinical implications of interleukin (IL)-10 induced by non-small-cell lung cancer"Annals of Oncology. 11. 815-819 (2000)
• [文献書誌] F.Morino,Y.Ueyama, et.al: "Hammerhead ribozyme specifically inhibits vascular endothelial growth factor gene expression in a human hepatocellular carcinoma cell line."International Journal of Oncology. 17. 495-499 (2000)
• [文献書誌] T.Tsuchida,Y.Ueyama, et al.: "Adenovirus-mediated anti-K-ras ribozyme induces apoptosis and growth suppression of human pancreatic carcinoma"Cancer Gene Therapy. 7(3). 373-383 (2000)