| 研究課題/領域番号 |
11694250
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
平井 久丸 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (90181130)
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| 研究分担者 |
佐々木 光 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60282638)
千葉 滋 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60212049)
三谷 絹子 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50251244)
高橋 強志 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
小川 誠司 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60292900)
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| キーワード | インテグリン / Cas / SH3 / CIZ / マトリックスメタロプロテアーゼ / プロモーター / 転写制御 |
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| 研究概要 |
インテグリン下流のシグナル分子であるp130CasのSH3領域に結合する蛋白質をファーウエスタン法によりクローニングし、CIZ(Cas interacting zinc finger protein)と名付けた。CIZは、5個から8個のKr殫pelタイプのzinc fingerを持ち、その下流にはグルタミンーアラニンリピートが存在した。組織分布上、CIZは、脳、心臓、肝臓、腎臓、精巣で発現が多く認められた。CIZは、細胞内でCasと結合し、その細胞内局在は、主に核に存在したが、一部は、Casと同じく接着斑に存在した。また、核と細胞質とを行き来していることも判明した。次に、核におけるCIZの役割を調べるため、CASTing法(cyclic amplification and sequencing technology)により、CIZのDNA結合コンセンサスを(G/C)AAAAA(A)と決定した。この配列はマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の遺伝子のプロモータ領域にしばしば認められる。MMP-1(コラゲナーゼ)のプロモータ領域に由来するCIZ結合コンセンサスを含む配列は、CIZとDNA-タンパク質複合体を形成し、これは抗CIZ抗体でスーパーシフトが認められた。この配列を用いて作成した人工的プロモーターからの転写はCIZの大量発現により上昇した。さらに、MMP-1、MMP-3(ストロムリシン)、MMP-7(マトリリシン)プロモーターからの転写もCIZの発現により上昇した。蛋白質レベルでも、CIZを大量発現するHT-1080の細胞株の培養上清中のProMMP-7の量が増加していた。Casとの関連では、Casノックアウト細胞において、Casを発現することで、CIZによる転写活性化が増強された。これらのことから、CIZは、マトリックスメタロプロテアーゼの転写制御を行っていることが判明した。
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