臨床応用を目的としたアルブミン変異体の設計と評価

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11694298
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 小田切 優樹 熊本大学, 薬学部, 教授 (80120145)
• 研究分担者: 棚瀬 純男 熊本大学, 医学部, 助教授 (20112401) ; 甲斐 広文 熊本大学, 薬学部, 助教授 (30194658)
• キーワード: アルブミン / 遺伝子組換え技術 / 臨床応用 / 血液製剤 / 人工血液

研究概要

本研究では、現在臨床で大きな課題となっている血中半減期について、その顕著な延長を試み、アルブミン製剤の大幅な消費量削減の目的達成のため、国際共同研究を推進するものである。以下に得られた知見を要約する。
1)精製した変異HSA(K199A、K439A、K525A及びK199A/K439A/K525A)の構造特性について、遠紫外及び近紫外領域CDスペクトル、抗HSAポリクローナル抗体を用いて検討した。その結果、二次構造、三次構造及び抗体の認識性に血漿由来HSAと有意な差は観察されなかった。
2)変異HSAは化学的安定性、熱安定性、薬物輸送性及びエステラーゼ様活性において血漿由来HSAと有意な差は観察されなかった。
3)^<125>Iでラベル化した変異体の静注後の血漿中濃度推移は2相性を示し、消失相(β相)から算出した半減期は、いずれの場合も血漿由来HSA(約30時間)より短かった。
4)オーフス大学Kragh-Hansen博士は平成11年10月23日〜11月7日の2週間、平成12年5月1日〜10月29日、熊本大学に滞在し、アルブミン変異体の動態特性や生物学的性質について討議した。またロンドン大学インペリアル校Curry博士は平成12年9月27日〜10月6日、熊本大学に滞在し、変異体の構造特性について討議した。2人の海外共同研究者とは、今回のプロジェクトの目標達成のために密に連携を保つことを確認した。

研究成果

• [文献書誌] K.Yamasaki et al: "Interactive binding to the two Principal ligand binding sites of HSA : effect of the N-B transition"Biochimica et Biophysica Acta. 1432. 313-323 (1999)
• [文献書誌] V.T.G.Chung et al: "Helix of subdomain III A of HSA is the region primarily Photolabeled by ketoprofen"Biochimica et Biophysica Acta. 1434. 18-30 (1999)
• [文献書誌] Y.Tsutsumi: "Decreased bilirubin binding capacity in uremic serum caused by an aaccumulation of furan dicarboxylic acid"Nephron. 85(1). 60-64 (2000)
• [文献書誌] H.Watanabe et al: "Role of Arg-410 and Tyr-411 in human serum albumin for ligand binding and esterase-like activity"Biochemical Journal. 349. 813-819 (2000)
• [文献書誌] T.Sakai et al: "Interaction between indoxyl sulfate, a typical uremic toxin bound to site II, and ligands bound to site I of HSA"Pharmaceutical Research. 18(4)(in press). (2001)
• [文献書誌] H.Watanabe et al: "Conformational stability and warfarin binding properties of human serum albumin studied by recombinant mutants"Biochamical Journal. (in press). (2001)
• [文献書誌] 丸山徹,小田切優樹(分担)沢田康文 他(編集): "医薬品の適正使用のための臨床薬物動態"じほう. 834 (2000)
• [文献書誌] 小田切優樹,今井輝子(分担)永井恒司(監修): "新・ドラッグデリバリーシステム"シーエムシー. 227 (2000)