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Pseudomonas属細菌由来のエチレン生成酵素(EFE)は2-オキソグルタール酸を基質としてエチレンとコハク酸を2対1の割合で生成する酵素である。本酵素のユニークな触媒反応の解析を試みるため、まず、本酵素の結晶構造解析を行う目的で、このEFE遺伝子を組み込んだ大腸菌の培養液2リットルからのEFEの大量調製を試みた。その結果、無細胞抽出液から除核酸した後に、高速液体クロマトグラフィーの陰イオン交換カラムを用いることで純品のEFEを得ることが出来た。しかし、ウエスタンブロッティング解析の結果、EFEの分解断片が認められた。分解断片が微量存在する段階ではあるが、現在、酵素の結晶化を試みている。
一方、EFEの活性中心のモデル系として同じ2-オキソグルタール酸依存生ジオキシゲナーゼに分類されるセファロスポリンC合成酵素の活性中心に存在するアミノ酸残基をもとに、部位特異的改変を導入した結果、エチレンとコハク酸の生成比が野性型とは異なる(1.7対1)変異型EFEの作製が出来た。
現在、エチレンのみ、もしくはコハク酸のみを生成するような変異型EFEの作製を検討中である。
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