| 研究概要 |
本研究では,まず二酸化炭素固定能を有するPseudomonas diminuta由来リンゴ酸酵素遺伝子を獲得することを目指した.
リンゴ酸酵素遺伝子をクローニングするためにまず本酵素のアミノ酸配列を調べることを試みた.ところが,現在までのところアミノ酸配列を解析するまでには至っていない.そこで,アミノ酸配列解析と平行してショットガンクローニング法ならびにPCR法をおこなった.ショットガンクローニング法では,形質転換体が現在のところ得られていない.PCR法では,他生物種由来リンゴ酸酵素間で相同性の高い部分からPCRプライマーを設計することによりPCR増幅を行った.その結果,630塩基対の増幅断片が得られた.この増幅断片をプラスミドベクターに組み込み,大腸菌を形質転換した.その結果,目的断片を含む形質転換体の獲得に成功した.
今後,この増幅断片の塩基配列を解析したのち,この増幅断片をプローブとして用いてリンゴ酸酵素遺伝子の獲得を試みる予定である.また,アミノ酸配列解析ならびにショットガンクローニング法もこれと平行しで行う.
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