| 研究概要 |
タイト結合(TJ)構成蛋白claudin-1(CL-1)は、N末とC末を細胞質側に向け細胞膜を4回貫通している。また、TJの裏打ち蛋白であるZO-1は、CL-1のC末と結合している。(1)CL-1のC末にmyc-tagを付けて、MDCK細胞で過剰発現した。その結果、transepithelial electrical resistance(TER)値が上昇し、FITC-dextranによる細胞間透過性が減少した。このことから、CL-1の過剰発現によりMDCK細胞のバリア機能が亢進することがわかった。この結果はEuropean Journal of Cell Biology 78(12):849-855,1999に発表した。(2)CL-1のZO-1結合ドメインと考えられているC末端領域を除去してMDCK細胞で発現した。これをΔCmycと呼ぶ。その結果、本来TJがない細胞の側面膜に、TJ様の構造ができることがフリーズフラクチャーの観察でわかった。フラクチャーラベルにより、このTJ様のストランドはΔCmycで構成されていることがわかった。このことから、CL-1はZO-1との結合非依存性にTJ様のストランドを形成できるが、このストランドがTJへ局在化するためにはZO-1との結合が関与していることが示唆された。ΔCmycの発現によりTER値はやや上昇するが、FITC-dextranによる細胞間透過性はほとんど変化しなかった。
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