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1.担癌ヌードマウスの作成
ヒト粘液型軟骨肉腫より樹立した細胞株HCS-TG/C3、HCS-TG/E2は、その後の調査でヌードマウスでの造腫瘍性が弱くin vivoでの遺伝子治療実験には不適当と考え、これらのクローンの親株であるHCS-TG細胞をヌードマウスに移植し皮下腫瘍を作成した。この腫瘍はヌードマウスで継代可能であった。
2.CMVプロモーターにより発現制御されるHerpes Simplex Virus Tymidine Kinase(HSV-TK)遺伝子ベクターのin vivo electroporationによる腫瘍内導入
遺伝子の細胞内移行の至適条件を決定するため腫瘍が直径5cm程度に達したときに、FITC標識オリゴヌクレオチドを腫瘍内に5箇所注射し、それぞれの周囲に、6本の針電極を組み合わせ簡便に3方向から電圧をかけられる電極を挿入しelectroporationを行った。翌日、腫瘍組織を摘出し凍結切片を作成して蛍光顕微鏡下に細胞内のFITCラベルを観察した。FITCラベルオリゴヌクレオチドは核内に局在しており、その導入が確認された。また同時にelectroporation の至適条件を決定した。現在、CMVプロモーター制御のHSV-TKとクラゲ蛍光蛋白GFPの融合蛋白の遺伝子をヌードマウス腫瘍に注射、electroporationを行い、腫瘍内での蛋白発現をGFPの蛍光を観察することにより経時的に解析した。
3.軟骨特異的Xl型コラーゲンalpha1鎖のプロモーターを含むHSV-TK遺伝子発現ベクターの作成
PNASSβをバックボーンにColXIa1プロモーターおよび第1イントロン、HSV-TK/GFP fusion geneの挿入を試みたが、XI型コラーゲン発現細胞において正しい発現を示すクローンが得られなかったため、別の発現ベクターに対しプロモーターを入れ替えてコンストラクションを行った。
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