組み換えマレック病ウイルスを用いたアポトーシス誘導型抗腫瘍ワクチンの試作

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11836001
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 大橋 和彦 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (90250498)
• 研究分担者: 高木 道浩 神戸大学, 農学部, 助手 (90301283) ; 杉本 千尋 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (90231373)
• キーワード: マレック病ウイルス / meq遺伝子

研究概要

マレック病ウイルス(MDV)はヘルペスウイルス科に属し、鶏に悪性リンパ腫を主徴とするマレック病(MD)を引き起こすが、その腫瘍化の分子機構については、未だ判明していない。MDVはその病原性により3種類の血清型に分類される。MDV血清型1(MDV1)は、弱毒ワクチン株(CVI988等)を除いて、自然宿主である鶏に腫瘍を引き起こす。そこで、強毒株の腫瘍化の機構や弱毒ワクチン株の防御機構の解明を目的としてMDV1特異的タンパクをコードし、腫瘍化に重要と考えられているmeq遺伝子について、強毒および弱毒MDV1株間での相違を検討した。
強毒MDV1株であるRB1B、Md5やワクチン株であるCVI988を感染させた鶏繊維芽細胞や腎臓細胞より全細胞DNAを抽出し、PCR法、およびサザンブロット法にて解析した。またMD腫瘍由来株化細胞からもDNAを抽出し、同様に解析した。強毒MDV1株では既に報告されているmeq遺伝子のみが検出されたが、弱毒株であるCVI988では、このmeq遺伝子と共に、より大きいサイズのDNA断片(L-meq)も検出された。さらに強毒MDVであるJM株をinvitroで70代以上継代して弱毒化したものでも同様にL-meqが検出された。L-meq断片の塩基配列を決定したところ、Meqタンパクコード領域に178bpの塩基が挿入されている新しいmeq遺伝子が同定された。この新しいmeq遺伝子内では178bpの塩基挿入により、フレームシフトが起こっていることが示された。また検査した全てのMD腫瘍株化細胞でもL-meqが検出された。
以上より、meq遺伝子の変化がCVI988株の弱毒化と腫瘍原性の消失に関与していることが示唆された。またMD腫瘍株化細胞でもL-meqが存在していたことから、meq遺伝子が腫瘍化には重要であるが、腫瘍形質の維持には必須ではないことも示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Lee, S.I.,: "Heparin Inhibits Plaque Formation by cell-free Marek's Disease Viruses in vitro."J.Vet.Med.Sci.. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] Takagi, M.,: "Identification of new deletedforms of the p53 transcripts and their products in Marek's disease lymphoblastoid cell lines."Avian Dis.. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] Ohashi, K.,: "Differencesin the kinetic changes of lymphocyte populations and cytokine profiles between chickens genetically susceptible and resistant to Marek's disease."Avian Dis.. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] Lee, S.I.,: "Insertion of a 178-bp sequenceinto the meq Gene of Marek's Disease Virus Serotype 1."Avian Dis.. (印刷中). (2001)
• [文献書誌] Lee, S.I.,: "Differencein the meq gene between oncogenic and attenuatedstrains of Marek's disease virus serotype 1."J.Vet.Med.Sci.. 62. 287-292 (2000)