| 研究概要 |
本研究では、『生活習慣病の遺伝子多型解析のための技術革新』を目的とし、大量検体を迅速、正確、安価に処理できる技術の確立を目指している。本年度は共同研究施設への DNA マイクロアレイ装置の導入が見送られたため、TaqMan ケミストリー法を応用したASO(allele specific oligonucleotiide hybridization)による半自動遺伝子型決定法を確立した。本法では、プライマーとプローブの設計と、至適温度条件の設定が最も重要であり、極端にGC rich な領域や単塩基の連続した配列には不向きであることも判明した。しかし、ゲル電気泳動が不用で、制限酵素処理も必要としないことから、本法のランニングコストは従来法とほぼ同様で、実験時間は約1/10に短縮可能であった。500検体を PCR-RFLP と Taq Man PCR 法の両者で検討した結果、1例の相違も認められず、再現性、信頼性は良好であった。Angiotensinogen 遺伝子のT235アリルは高血圧感受性を高めることが知られているが、我々はこれと完全な連鎖不平衡にあるT+31C多型を5,000人弱の一般集団で検討し、同多型が高血圧家族暦と関連があることを示した(Hypertension,2000,inpress)。岩手県で実施中の農村部地域住民の大規模コホート研究では、東北大学倫理委員会の承認を得て、24時間血圧変動と関連する遺伝因子、高血圧に起因する合併症と関連する遺伝因子をTaq Mac PCR法を用いて検討中であり、複数の循環器疾患候補遺伝子多型が迅速に決定されている。
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