川崎病の病因の未知抗体をコードする遺伝子探索にもとづく独創的手法による解明と展開

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11877129
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 近藤 直実 岐阜大学, 医学部, 教授 (50124714)
• キーワード: 川崎病 / B細胞 / VDJ領域 / CDR3

研究概要

平成11年度は
(1)川崎病患者でみられる抗体をコードしている免疫グロブリン遺伝子を決定するために川崎病患者末消リンパ球からDNAおよびRNAを採取し、RNAからはcDNAを作成した。
DNAまたはcDNAを用いて、免疫グロブリン遺伝子のvariable regionのVDJとconstant regionのCγ部分のprimerを設定して、PCRまたはRT-PCRを用いて増巾させ、またnested PCRを行い、増巾バンドをPC19ベクターにてクローニングした。これから川崎病において使用されるV領域、CDR3領域の塩基配列の特性を決定し、さらにアミノ酸配列を決定した。
(2)川崎病におけるV領域のアミノ酸配列からコンピューターを用いて系統樹を作成したところ予想に反して幅広く分布していたが、一部に集積の傾向が認められた。この集積性が他の既知の抗体、溶連菌、ウイルスなどに対する抗体タンパクのV領域といかなる差異を有するか更に検討をすすめており、興味ある結果が得られつつある。
以上の結果をもとに現在、(1)決定された塩基配列を有するVDJ-Cγを発現ベクターに組み込んで大腸菌でタンパク、すなわち抗体を作成し(2)さらに作成した川崎病特異抗体を用いた探索から川崎病の病因を確定するためカラムによる抗体吸着と(3)既存の抗原に対比してV領域アミノ酸をコンピューター分析しており、これから結論を得る。

研究成果

• [文献書誌] Kaneko H, Kondo N,et al.: "Expression of BLM gene in human haematopoietic cells."Clin Exp Immunol. 118. 285-289 (1999)
• [文献書誌] Tashita H, Kondo N,et al.: "Molecular basis of selective Ig G2 deficiency:The mutated membrane-bouond form of γ2 heavy chain caused complete IgG2 deficiency in two Japanese siblings."J Clin Invest. 101. 677-681 (1998)
• [文献書誌] Kondo N,et al.: "Reduced interferon gamma production by antigen stimulated cord blood mononuclear cells is a risk factor of allergic disorders. -6-year follow-up study."Clin Exp Allergy. 28. 1340-1344 (1998)
• [文献書誌] Orii Ke, Kondo N, et al.: "Genes for the human mitochondrial trifunctional protein α-and β-subunits are divergently transcribed from a common promoter region."J Biol Chem. 274. 8077-8084 (1999)
• [文献書誌] Fukao T, Kondo N, et al.: "ATM is uprefulated during the mitogenic response in peripheral blood mononuclear sells."Blood. 94. 1998-2006 (1999)
• [文献書誌] Matsui E, Kondo N, et al.: "Mutations so the IL-12 receptor β2 chain gene in some atopic subjects."Biochem Biophy Res Commun. 266. 551-555 (1999)
• [文献書誌] 近藤直実: "現代内科学:原発性免疫不全症候群 (1)抗体不全を主とする疾患"金芳堂. 2384 (1997)
• [文献書誌] 近藤直実: "分子アレルギー学:アトピーとIgE遺伝子"メディカルレビュー社. 599 (1998)