肝臓を標的とした「臓器再生」に向けた基礎的研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11877192
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 深尾 立 筑波大学, 臨床医学系, 教授 (50091921)
• 研究分担者: 谷口 英樹 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (70292555) ; 中内 啓光 筑波大学, 基礎医学系, 教授 (40175485)
• キーワード: 再生 / 自己修復能

研究概要

単離した肝細胞集団の中から、多能性を持つ肝幹細胞をFACS(Fluorescence activated cell sorter)とモノクローナル抗体を用いた細胞分離法により濃縮・純化し、それらの機能解析を行うことを目的として研究を行った。まず、in vitro肝幹細胞機能解析系の確立を目的として、マウス胎仔肝細胞の培養系を検討し、1個の細胞を始点とするクローン性コロニーを効率よく誘導可能な培養条件を決定した。そして、このコロニー形成能を指標として、FACSとモノクローナル抗体により画分化したマウス胎仔肝から単離した細胞群の解析を行った。その結果、胎仔肝中の非血球画分であるCD45^-TER119^-細胞から段階的に画分化を進め、最終的にc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞中に限定的、かつ、高頻度に増殖能の高いコロニー形成能を有した細胞が存在することが判明した。さらに、それらのクローン性コロニーを拾い上げRT-PCRおよび免疫染色法による細胞系列マーカーの発現の検討を行った。その結果、肝細胞マーカーと胆管細胞マーカーの発現を共に確認した。すなわち、1個のc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞から肝細胞と胆管細胞という異なる系列の細胞が分化し得ることを明確に証明した。また、FACSにより分離したc-Kit^-CD49f^+CD29^+CD45^-TER119^-細胞は、in vivoにおいても肝組織再構築能を有することを細胞移植により確認した。これらの結果は、マウス胎仔肝臓中のc-Kit^-CD49f^+CD29^+ CD45^-TER119^-細胞は、高い増殖能、多分化能、組織再構築能を兼ね備えた肝幹細胞(hepatic stem cell)であることを示唆する。今後、この肝幹細胞の分化・増殖機構を培養系を用いて解析し、「臓器再生」の基盤となる知見および技術を確立する予定である。

研究成果

• [文献書誌] H,Taniguchi,et,al.: "Usefullness of flowcytemetric cell sorting for cnrichment of hepatic stem cells in the liver."Transplantation Proceedings. (in press).
• [文献書誌] Y.Zheng,H.Taniguchi,et,al.: "Effects of four different extracellular matrixes on clonal culture of murine fetal hepatocytes."Thansplantation Proceedings. (in press).
• [文献書誌] Y,Zheng,H,Taniguchi,et.al.: "Clonal culture of the murnine fetal hepatocytes at extremely low density and the effects of growth factors."Transplantation Proceedings. (in press).
• [文献書誌] A.Suzuki,H.Taniguchi,et.al.: "Clonal colony formation of hepatic stem / progenitor cells were enhanced by embryonic fibroblast conditioned medium."Transplantation Proceedings. (in press).
• [文献書誌] A.Suzuki,H.Taniguchi,et.al.: "Proliferafive and funetional ability of transplanted murine neonatal hepatocytes in adult liver."Transplantation Proceedings. (in press).
• [文献書誌] H.Taniguchi,et.al.: "Clonogenic colony forming ability of flewcytomethically isolated hepatic cells in the murine tetal liver."Cell Transplantation. (in press).