| 研究課題/領域番号 |
11877363
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
中村 亮 徳島大学, 歯学部, 教授 (30034169)
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| 研究分担者 |
田部 慎一 徳島大学, 歯学部, 助手 (40284301)
杉山 明子 徳島大学, 歯学部, 助手 (90304534)
日野出 大輔 徳島大学, 歯学部, 助教授 (70189801)
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| キーワード | 歯周病原性細菌 / 熱ショックタンパク質 / Campylobacter rectus / Helicobacter pylori / GroEL様タンパク質 / サザンハイブリダイゼーション / 遺伝子解析 / N末端アミノ酸配列 |
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| 研究概要 |
歯周病原性細菌の1つであるCampylobacter rectus菌体より熱ショックタンパク質に属するGroEL様タンパク質を抽出し、この分子の構造解析を試みた。ATP-agaroseカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーとSDS-PAGEを応用した電気溶出により得られた64kDaタンパク質のN末端アミノ酸配列はAKEIFFSDEARNRLYEGVRKLNDAVKVTMGPRGRNであり、SwissProt data bankを利用した相同性の探索によりHelicobacter pylori GroELと83%(29残基/35残基)と特に高い相同性を示すことが明らかとなった。そこで、このデータを利用したセンスプライマー及びH.pylori含め他の細菌由来GroELにおいても相同性の高いC末端側配列(-GGMGGMM)を利用してアンチセンスプライマーを設計し、C.rectus由来genomic DNAをテンプレートとしたPCRを行った。PCR産物はアガロース電気泳動にて純度を確認後、digoxigenin標識してプローブとした。C.rectus genomic DNAを制限酵素で切断後、サンプルを電気泳動、膜転写して前述のプローブによるサザンハイブリダイゼーションを行ったところ、Hind IIIは1450と948bp、Pst Iは2950bp、Bam HIは6400bpの部位で反応バンドが認められた。今後、Pst I処理サンプルの反応バンド付近のDNA断片を抽出し、ベクターに組み込んだ後、大腸菌へ形質転換させて、C.rectus GroEL様タンパク質の遺伝子解析を進めていく予定である。
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