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本研究では細胞内から特定のmRNP(mRNA-タンパク質複合体)を生化学的に精製する手法を確立し、これを用いてmiRNAの結合によるmRNPの構成変化を解析することにより、miRNA作用実態の解明を目指すものである。
初年度は、培養細胞からmRNPを精製する技術の確立を目標に研究を行った。まずmRNP精製用のタグとして、BoxB配列-λペプチド、BoxC/D配列-L7Aeタンパク質、PP7ヘアピン配列-PP7CPを用いてmRNPの精製効率、精製度の比較を行った。調べた条件下においてはBoxB配列-λペプチド、PP7ヘアピン配列-PP7CPの組み合わせが同程度の精製効率、精製度でよいことがわかったが、実際に細胞内からmRNP精製を試みると、レポーターmRNPの回収効率が低く、レポーターmRNAと共精製されるタンパク質の量は精製担体、精製タグに非特異的に結合しているタンパク質量とほとんど差がみられなかった。さらに精製条件の検討、RNAタグのリピート数・挿入位置、レポーターの遺伝子構造などの種々の検討を重ねたが、この問題が現時点で解決できておらず、mRNPを精製する技術の確立には至らなかった。
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