NK細胞の標的認識に関与する新規C型レクチンの同定とその機能解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12033223
• 研究機関: (財)東京都医学研究機構
• 研究代表者: 反町 典子 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (30217468)
• 研究分担者: 烏山 一 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (60195013)
• キーワード: NK細胞 / C型レクチン / Ly-49 / CD94 / マウス / モノクローナル抗体 / NKレセプター / 遺伝子クローニング

研究概要

本研究はNK細胞の標的認識に関わる新規C型レクチンの同定とその機能解析を目的として行った。これまでに、異なる2種類のアプローチを行い、それぞれのアプローチからC型レクチンの同定に成功した。
(1)新規NKレセプターに対するモノクローナル抗体の樹立:これまでにNK細胞に対する種々のモノクローナル抗体を作製し、発現分布、NK細胞傷害活性に与える影響から、新規分子を認識すると考えられる抗体を選別し、その中の一つがC型レクチンファミリーに属するNKレセプターであるCD94を認識することを明らかにした。新規に得られた抗CD94抗体を用いて、CD94が全てのNKおよびNKT細胞に発現すること、NKおよびNKT細胞はCD94強陽性とCD94弱陽性細胞の2種類の細胞亜集団からなることを見いだした。さらに、マウスCD94は標的細胞上のQa-1分子を認識して細胞傷害活性を抑制する、抑制性レセプターとして機能することを明らかにした。
(2)C型レクチンファミリーの一次構造上の相同性を利用したPCRクローニング:NK細胞の分化調節機構を明らかにすることを最終目的として、未熟NK細胞上のNKレセプターの検索を行った。C型レクチンファミリーであるLy-49分子の保存されている配列をもとにPCRクローニングを行った結果、新規のLy-49としてLy-49Qを同定した。Ly-49Qはラットで同定されているC型レクチンに高い相同性を示し、細胞内領域にITIM配列を持つことから、抑制性レセプターとして機能することが推察された。遺伝子導入実験からLy-49Qはホモダイマーとして細胞表面に発現しうることを示した。さらにLy-49Q遺伝子導入株を抗原として、抗Ly-49Qモノクローナル抗体を作製した。現在得られた抗体の特異性(他のLy-49分子に対する交差反応も含む)について検討をすすめ、さらにモノクローナル抗体を用いてLy-49Qの発現分布とその機能解析を進めている。

研究成果

• [文献書誌] Toyama-Sorimachi,N., et al.: "Mouse CD94 participates in Qa-1-mediated self recognition by NK cells and delivers inhibitory signals independent of Ly-49."J.Immunol.. (In press).
• [文献書誌] Fujimoto,T. et al.: "Chondroitin sulfate proteoglycan aggrecan specifically binds CD44."Int.Immunol.. (In press).
• [文献書誌] Endo,J., et al.: "Deficiency of a STE20/PAK family kinase LOK leads to the acceleration of LFA-1 clustering and cell adhesion of activated lymphocytes."FEBS Letters. 468. 234-238 (2000)
• [文献書誌] Tagawa,K., et al.: "Myopathy phenotype of transgenic mice expressing active site-mutated inactive p94 skeletal muscle-specific calpain, the gene product responsible for limb girdle muscular dystrophy type 2A."Human Mol.Genet.. 9. 1393-1402 (2000)
• [文献書誌] 反町典子: "NK細胞の正と負の標的認識機構"細胞工学 増刊号. 19. 255-262 (2000)
• [文献書誌] 反町典子: "NK細胞の標的認識とウイルスのエスケープ機構"実験医学 増刊号. (印刷中).