ヒトCD34陰性造血幹細胞のin vitro解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12036221
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 安藤 潔 東海大学, 医学部, 講師 (70176014)
• 研究分担者: 堀田 知光 東海大学, 医学部, 教授 (70173606)
• キーワード: CD34 / 造血幹細胞 / VEGFR / Tie-1 / Tie-2 / TPO-R

研究概要

研究実績の概要
最近CD34陰性のより未分化な細胞の存在がヒトを含む哺乳類で報告されており新たなクラスの造血幹細胞として注目されている。CD34陰性幹細胞はコロニー形成能やLTC-IC活性をほとんど持たずSRC活性も低い。さらにCD34陰性幹細胞の存在頻度が低いことと培養が困難であることより細胞生物学的、分子生物学的解析が困難であった。われわれは最近マウス骨髄ストローマ細胞を利用することによりこれらの細胞を培養しCD34陽性幹細胞を誘導することに成功した。しかしながらわれわれの分画した分化マーカー陰性CD34陰性(Lin-CD34-)細胞集団もまだ十分に幹細胞を純化しているとは言い難く細胞生物学的、分子生物学的解析のためにはCD34陰性幹細胞陽性マーカーを同定することを目的に本実験計画を設定した。
1 CD34陰性造血幹細胞純化法の検討
筆者らは赤血球除去フィルターを利用してヒト臍帯血よりlineageマーカー陰性CD34陰性細胞を100倍濃縮することに成功した。さらに免疫磁気ビーズ法、FACSを組み合わせることにより99%以上の純度でこれらの細胞を回収することが可能とした。さらに本年度はこれらの細胞をVEGFR,Tie-1,Tie-2,TPO-Rなど既存のモノクローナル抗体を利用して細分化することに成功した。
2 造血活性の検討
以上によりTPO-RがCD34陰性細胞の表面マーカーである可能性が示されたので、さらにコロニー形成能を検討した。現在NOD/SCIDマウスに移植することにより長期造血再構築能および多分可能を検討し、造血幹細胞であることを確認中である。

研究成果

• [文献書誌] Ando K,Nakamura Y, et al.: "Extensive generation of human CD34+ hematopoietic stem cells from CD34(-)Lin(-) cells in vitro"Experimental Hematology. 28. 690-699 (2000)
• [文献書誌] Nakamura Y,Ando K, et al.: "Effective enrichment of the precursor populations of human CD34+ hematopoietic cells by newly developed filter system."British Jornal of Hematology. 108. 801-804 (2000)
• [文献書誌] Shimakura Y,Ando K, et al.: "Murine stromal cell line HESS-5 maintains reconstituting ability of ex vivo-generated hematopoietic stem cells from human bone marrow and cytokine-mobilized peripheral blood."Stem cells. 18. 183-189 (2000)
• [文献書誌] Hagihara M,Ando K, et al.: "The efficient generation of CD83 positive immunocompetent dendritic cells from CD14 positive acute myelomonocytic or monocytic leukemia cells in vitro."Leukemia Research. (in press). (2001)
• [文献書誌] Yin Y,Hagihara M,Ando K, et al.: "Enhancement of human cord blood CD34+ cell-derived natural killer cell cytotoxicity by dendric cells."Jornal of Immunology. (in press). (2001)