1)セラミドによるアポトーシス誘導時のシグナル伝達系の解析 我々の開発した抗セラミド抗体を用いて、白血病細胞の抗癌剤によるアポトーシス誘導の際のセラミドの細胞内での増加を免疫染色法により確認した。さらに、セラミドの下流シグナルとしてataxia telangiectasia遺伝子(ATM)の産物であるATMキナーゼが、セラミドのよりリン酸化され活性化されること、ATM遺伝子のミュータント細胞株まではセラミドによるリン酸が起こらないため細胞膜透過性のセラミドによるアポトーシス誘導が抑制され、正常ATM遺伝子の細胞株やATMを遺伝子導入下細胞株ではセラミドによるアポトーシスが誘導される事を見いだした。 (2)スフィンゴミエリン合成酵素(SMS)の遺伝子クローニング これまで、種々の方法によってSMS遺伝子のクローニングを試みてきたが、成功していない。今回は、遺伝子ライブラリイの導入にレトロバイラスを用いて効率化を図り、その上に、導入細胞の選択にスフインゴミエリンに対する高親和性蛋白であるライセニンを使用し、陽性細胞であるSMS導入細胞をFACSを用いてソートすることで、クローニングを試みている。 (3)セラミドの細胞内局在 抗セラミド抗体を用いてFASにより誘導されるアポトーシスについて検討したところ、セラミドの核での増強を誘導する事が判明し、従来報告された細胞膜やミトコンドリア以外のシグナルな場が想定された。
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