研究概要 |
1.PCNAクランプローディング機構の解析 精製した因子を用いてクランプローダー、RFCがクランプ,PCNAをロードする過程を電子顕微鏡を用いた蛋白質イメージングを中心に解析した。その結果、RFCがATP加水分解過程で構造変化をすることを明らかにした。 2.DNAポリメラーゼ δ複合体の再構築 複製フォークを構成するDNAポリメラーゼδ複合体をバキュロウイルス発現系を用いて再構築した。その結果、第3のサブユニット、p66の存在により、より安定な複合体が形成されること、またこのサブユニットの有無によりDNA合成の特性の異なる複合体が形成されることを明らかにした。 3.PCNA結合蛋白質の解析 PCNA結合因子の一つ、DNAメチル化酵素とPCNAの結合の詳細を解析し、PCNAとこの酵素の結合によりDNAメチル化の効率が上昇することを明らかにした。さらにPCNAカラムを用いたPCNA結合因子の網羅的解析により染色体接着因Chl12が新規PCNA結合因子として単離されることを明らかにした。 4.斯規クランプ、クランプローダー分子の再構築と機能解析 上記Chl12を含め、クランプローダーRFCおよびクランプPCNAに類似した因子が見いだされている。その類似因子の内、チェックポイント応答に関与するクランプ、クランプローダー様分子の再構築を行い、蛋白質イメージングにより、PCNAおよびRFCと相同の構造を持つことを明らかにした。染色体接着に関与するChl12においても、クランプローダー様複合体を形成し、PCNAがこの標的クランプの一つであることを示した。
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