| 研究課題/領域番号 |
12204011
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
前田 忠計 北里大学, 理学部, 教授 (90265728)
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| 研究分担者 |
藤田 芳邦 北里大学, 医学部, 助教授 (50133286)
馬場 志郎 北里大学, 医学部, 教授 (00051889)
大石 正道 北里大学, 理学部, 助手 (40233027)
松崎 尹雄 三菱化学(株), 科学技術研究センター, フェロー
古舘 専一 北里大学, 医学部, 助教授 (80095512)
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| キーワード | プロテオーム解析 / 糖尿病特異的プロテオーム / ob / obマウス / db / dbマウス / OLETFラット / ヒト標品のプロテオーム解析 / ヒト・ティッシュ・バンク / 電気泳動画像データベース |
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| 研究概要 |
(1)昨年度開発した酸化傷害タンパク質特異的染色法を使い、糖尿病モデルラット各種臓器のプロテオーム解析をおこなった。(2)酸化傷害タンパク質を質量分析で検出するためのタグ、TOP(Tags for Oxidized Proteins)を開発した。TOPの化学構造は、(Affinity tag)-(Linker)-(Reactive site)で表され、中央のLinker領域を安定同位体で標識し、2種類のTOP(TOP1、TOP2)を作成する。Angiotensin II(8アミノ酸残基のペプチド)を人為的に酸化したものを使い、このタグの実証実験を行った。正常組織と疾病組織から得たタンパク質粗抽出液にそれぞれTOP1、TOP2を反応させ、反応後、両者を混合し、質量分析を行う。これによって疾病特異的に酸化傷害を受けたタンパク質を検出することができる。MS/MSにより酸化傷害部位を特定すれば、酸化傷害によるタンパク質の機能障害が解明できる。TOPの特徴は、(a)酸化傷害タンパク質を検出、(b)未反応試薬の除去が容易、(c)難溶性タンパク質の分析も可能、(d)微量の酸化傷害タンパク質の検出も可能、の4点である。(3)我々の2次元電気泳動法を使うと、転写・翻訳関係タンパク質を検出・同定できることが分かった。(4)栄養過多給餌によりOLETFラットに糖尿病を早期に発症させたときのプロテオーム変化を、普通食の場合と比較、解析した。(5)ヒト・組織と体液のティッシュバンクを開設した。(5)糖尿病性腎症により亡くなった患者由来の腎臓組織の解析を行った。
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