2000 年度実績報告書

ヒト神経幹細胞のクローン解析によるニューロン分化機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号	12210087
研究機関	京都大学
研究代表者	高橋政代京都大学, 医学研究科, 助手 (80252443)
研究分担者	高橋淳京都大学, 医学研究科, 助手 (10270779)
キーワード	ヒト / 塩基性線維芽細胞成長因子 / 上皮細胞成長因子 / 脳 / 網膜 / 虹彩色素上皮 / 神経幹細胞 / 培養
研究概要	ヒト胎児脳および網膜からの神経幹細胞の分離培養 11週齢のヒト胎児から大脳と眼球を摘出し、眼球からは網膜のみを剥離する。大脳および網膜を機械的および酵素にて細胞に分散したのち、DMEM/F12に塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)と上皮細胞増殖因子(EGF)を添加した無血清培地にて培養したところ、徐々に増殖、増大する細胞塊が得られた。この細胞塊を形成する細胞の多くはネスチン陽性の未分化な神経系細胞であり、神経幹細胞を含むと考えられているneural sphereと同様の細胞集団と思われた。さらに、この細胞塊をラミニンコートした培養皿でbFGFとEGFを除去して培養すると細胞は培養皿上に接着し、形態を変化させた。神経突起様の突起を伸ばした細胞の一部は免疫細胞化学的検討にてβチュブリンIII陽性の幼若な神経細胞に分化しており、また、一部はGFAP陽性のグリア細胞に分化していた。これらの結果からヒト胎児脳および網膜から神経幹細胞あるいは神経前駆細胞が得られたと考えられる。ヒト成体虹彩神経色素上皮細胞の培養我々は、成体ラット虹彩色素上皮細胞を上記と同様の培養条件で培養することにより、神経とグリアに分化する能力を有するネスチン陽性の神経前駆細胞が得られることを確認している。同様にして、緑内障手術の際に得られるヒト成体の虹彩色素上皮を培養することにより、増殖する細胞を得ている。現在この細胞の多分化能を検討中である。以上の実験はいずれも京都大学医の倫理委員会の承認を受けて実施したものである。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Takahashi M 他: "Rescue from photoreceptor degeneration in the rd mouse by human immunodeficiency virus vector-mediated gene transfer."J.Virol.. 73. 7812-7816 (1999)
[文献書誌] Nishida A 他: "Incorporation and differentiation of hippocampus-derived neural stem cells transplanted in injured adult rat retina."Invest Ophthalmol Vis Sci. 41. 4268-4274 (2000)
[文献書誌] Takahasi M 他: "Transplantation of nueral stem cell into the retina injured by transient ischemia."Invest.Opthalmol.Vis.Sci. (suppl.). 40,4. 727-727 (1999)
[文献書誌] Tida H 他: "Neurons generated from adult rat hippocampal stem cells form functional glutamatergi and GABAergic synapses in vitro."Exp Neurol.. 165,1. 66-76 (2000)
[文献書誌] Tanigaki K 他: "Notch1 and Notch3 instructively restrict bFGF-responsive multipotent neural progenitor cells to an astroglial fate."Neuron. 29,1. 45-55 (2001)
[文献書誌] Akita J 他: "Differentiation of adult rat hippocampus-derived neural stem cells in the embryonic retinal organ culture."Invest.Opthalmol.Vis.Sci. (suppl.). 41,4. 14-14 (2000)
[文献書誌] Takahashi M: "Tissue engineering for therapeutic use Vol.3.Ed.Yoshito Ikada"Elsvier Sience. 10 (1999)

2000 年度 実績報告書

ヒト神経幹細胞のクローン解析によるニューロン分化機構の解明

研究代表者

高橋 政代 京都大学, 医学研究科, 助手 (80252443)

研究成果

[文献書誌] Takahashi M 他: "Rescue from photoreceptor degeneration in the rd mouse by human immunodeficiency virus vector-mediated gene transfer."J.Virol.. 73. 7812-7816 (1999)

[文献書誌] Nishida A 他: "Incorporation and differentiation of hippocampus-derived neural stem cells transplanted in injured adult rat retina."Invest Ophthalmol Vis Sci. 41. 4268-4274 (2000)

[文献書誌] Takahasi M 他: "Transplantation of nueral stem cell into the retina injured by transient ischemia."Invest.Opthalmol.Vis.Sci. (suppl.). 40,4. 727-727 (1999)

[文献書誌] Tida H 他: "Neurons generated from adult rat hippocampal stem cells form functional glutamatergi and GABAergic synapses in vitro."Exp Neurol.. 165,1. 66-76 (2000)

[文献書誌] Tanigaki K 他: "Notch1 and Notch3 instructively restrict bFGF-responsive multipotent neural progenitor cells to an astroglial fate."Neuron. 29,1. 45-55 (2001)

[文献書誌] Akita J 他: "Differentiation of adult rat hippocampus-derived neural stem cells in the embryonic retinal organ culture."Invest.Opthalmol.Vis.Sci. (suppl.). 41,4. 14-14 (2000)

[文献書誌] Takahashi M: "Tissue engineering for therapeutic use Vol.3.Ed.Yoshito Ikada"Elsvier Sience. 10 (1999)

2000 年度実績報告書

高橋政代京都大学, 医学研究科, 助手 (80252443)