2002 年度実績報告書

Translesion synthesisの分子機構と発がん

研究課題

研究課題/領域番号	12213070
研究機関	大阪大学
研究代表者	花岡文雄大阪大学, 生命機能研究科, 教授 (50012670)
研究分担者	横井雅幸 , 助手 (00322701)
キーワード	DNA複製 / DNAポリメラーゼ / DNA修復 / 色素性乾皮症 / polイータ / 遺伝子ノックアウト
研究概要	研究代表者らは、損傷乗り越え複製(translesion synthesis)機構全般を総合的に理解し、発がんおよび発がん防御における役割を明らかにすることを目的として、以下に述べる研究を行った。 1)色素性乾皮症バリアント群原因遺伝子の産物であるDNAポリメラーゼ・イータ(pol イータ)の性質を詳細に調べた。その結果、このポリメラーゼがCPDを含む鋳型・プライマー型DNAと損傷を含まない鋳型・プライマー型DNAに対して同程度の結合活性を示した。一方、損傷乗り越えDNA合成を行えない大腸菌のKlenowやT4 DNAポリメラーゼはCPDを含むDNAより、損傷を含まないDNAに強く結合した。これらのことから、鋳型DNAにCPDが存在しても、損傷がないときと同様の強さで結合する性質はpolイータに特有のものであると考えられる。 2)損傷乗り越え複製に関与するYファミリーDNAポリメラーゼには、AからGまでの7つの領域が保存されている。ヒトpolイータのこれらの保存領域に点突然変異を導入し、ポリメラーゼ活性に重要なアミノ酸の同定を試みた。これまでに種を超えて保存されているアミノ酸のうち10個についてアラニンへの置換変異体を作成し、解祈したところ、そのうちの6つにおいてDNAポリメラーゼ活性が低下した。また活性の低下した変異polイータの中には鋳型DNAとの結合能や基質ヌクレオチドとの親和性が低下しているものがあった。 3)XP-V患者のモデルマウスを作成するため、翻訳開始コドンを含むエキソン2から8までをネオマイシン発現カセットと置換したターゲティングベクターでのKOマウス作成を試みたが、今のところホモ変異体は得られていない。そこで新たに、polイータの必須領域を含むエキソン8ヘネオマイシン発現カセットを挿入したターゲティングベクターを構築した。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Chiapperino, D.et al.: "Preferential misincorporation of Purine nucleotides by human DNA polymerase η opposite-benzo[a]pyrene 7,8-diol 9,10 epoxide deoxyguanosine"J.Biol.Chem.. 277. 11765-11771 (2002)
[文献書誌] Kusumoto, R.et al.: "Translesion synthesis by human DNA polymerase η across thymine glycol lesions"Biochemistry. 41. 6090-6099 (2002)
[文献書誌] Pavlov, Y.I.et al.: "Correlation of somatic hypermutation specificity and A-T base pair substitution errors by DNA polymerase eta during copying of a mouse immunoglobulin kappa light chain transgene"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 99. 9954-9959 (2002)
[文献書誌] Yamada, A.et al.: "Detection of reduced RNAsynthesis in UV-irradiated Cockayne syndrome B cells using an isolated nuclear system"Biochim.Biophys.Acta. 1592. 129-134 (2002)
[文献書誌] Servanit, L.et al.: "A role for DNA polymerase β in mutagenic UV lesions bypass"J.Biol.Chem.. 277. 50046-50053 (2002)
[文献書誌] Shimizu, M.et al.: "Erroneous incorporation of oxidized DNA precursors by Y-family DNA polymerases"EMBO Rep.. (印刷中). (2003)

2002 年度 実績報告書

Translesion synthesisの分子機構と発がん

研究代表者

花岡 文雄 大阪大学, 生命機能研究科, 教授 (50012670)

研究成果

[文献書誌] Chiapperino, D.et al.: "Preferential misincorporation of Purine nucleotides by human DNA polymerase η opposite-benzo[a]pyrene 7,8-diol 9,10 epoxide deoxyguanosine"J.Biol.Chem.. 277. 11765-11771 (2002)

[文献書誌] Kusumoto, R.et al.: "Translesion synthesis by human DNA polymerase η across thymine glycol lesions"Biochemistry. 41. 6090-6099 (2002)

[文献書誌] Pavlov, Y.I.et al.: "Correlation of somatic hypermutation specificity and A-T base pair substitution errors by DNA polymerase eta during copying of a mouse immunoglobulin kappa light chain transgene"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 99. 9954-9959 (2002)

[文献書誌] Yamada, A.et al.: "Detection of reduced RNAsynthesis in UV-irradiated Cockayne syndrome B cells using an isolated nuclear system"Biochim.Biophys.Acta. 1592. 129-134 (2002)

[文献書誌] Servanit, L.et al.: "A role for DNA polymerase β in mutagenic UV lesions bypass"J.Biol.Chem.. 277. 50046-50053 (2002)

[文献書誌] Shimizu, M.et al.: "Erroneous incorporation of oxidized DNA precursors by Y-family DNA polymerases"EMBO Rep.. (印刷中). (2003)

2002 年度実績報告書

花岡文雄大阪大学, 生命機能研究科, 教授 (50012670)