| 研究概要 |
本研究では、ヒト腫瘍における相同組換え遺伝子の構造解析の結果に基づいて、発がんにおける相同組換え異常の役割の解析を行った。ヒトRAD54Bはある種のがんにおいて構造異常をきたしていることが明らかとなったため、その機能異常と発がんとの関連性を分子レベルで解析するためにまずRAD54Bに対する抗体を作製した。RAD54とRAD51は直接結合して相同組換えに中心的役割をはたす蛋白質複合体を形成することが知られている。
そこで、COS細胞においてRAD54BとRAD51を強制発現させ、免疫沈降によってそれらの結合を解析した。その結果、これら二つの蛋白質の結合が確認された。また、強制発現を行わず定常状態のマウス、ヒトの各種細胞株においてもこれらの結合が認められた。結合に関わる部位の同定はGSTとの融合蛋白質のin vitroにおける結合実験で行った。その結果、RAD54のRAD51との結合にはN末端側の配列が必要であると同様に、RAD54BのN末端側200アミノ酸からなる蛋白質が結合に重要であることが明らかとなった。
RAD51をはじめとして相同組換えに関わる蛋白質は核内においてフォーカスを形成することが知られている。そこでRAD54Bの細胞内局在をその抗体を用いて共焦点顕微鏡により解析した。その結果、RAD54Bは核内でフォーカスを形成し、それらはRAD51,RAD54,BRCA1のフォーカスとほぼ一致した。しかし、RAD51などのフォーカス形成は電離放射線照射によって著明に誘導されるが、RAD54Bにおいては照射に関わらず形成がみられた。これらの結果より、RAD54Bは既知の相同組換え蛋白質と核内で複合体を形成していることが明らかとなり、相同組換えの異常とヒト発がんの関連性が示唆された。
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