| 研究課題/領域番号 |
12217010
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
石岡 千加史 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (60241577)
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| 研究分担者 |
加藤 俊介 東北大学, 医学部附属病院, 助手 (40312657)
柴田 浩行 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (50260071)
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| キーワード | p53 / missense mutation / PTEN / BRCA1 / MLH1 |
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| 研究概要 |
がん関連遺伝子変異の検出と機能評価のための手法を開発するために、基礎的・臨床的検討を行った。家族性乳癌患者40人を対象にBRCA1遺伝子とBRCA2遺伝子の変異を調べ、8例(20%)に病的意義のある変異を見出した。ストップコドンアッセイ(SC assay)で検出可能なタンパク質切断型変異が7例、ミスセンス変異が1例見られ、このミスセンス変異(BRCA1)は発現タンパク質の機能解析で評価した。網羅的ミスセンス変異導入法を開発、1塩基置換によって生じうるp53ミスセンス変異を全てを構築し個々の変異についてp53の特異的DNA結合による転写活性化能について評価した。その結果、変異、変異報告頻度、アミノ酸残基の保存性の3者には強い相関を確認したほか、多数の温度感受性変異、転写活性化能に関するプロモーター志向性が異なる変異を同定、一部のp53変異については哺乳動物細胞発現系に展開し、細胞周期やアポトーシスへの影響を評価した。PTEN遺伝子の機能を出芽酵母でアッセイする方法を検討するために、酵母PTENホモログとされるTEP1遺伝子2倍体変異株を2株作成し、ヒトPTENの発現系を作成した。グリオーマにおいてミスセンス変異を含むPTEN変異の存在は髄液播種と相関することが明らかになり、検出したPTENミスセンス変異の病的意義を支持する結果であった。遺伝性大腸癌由来のヒトMLH1のミスセンス変異を新たに40種類構築し機能評価し病的意義を明らかにした。
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