尿中HGF測定による泌尿器系腫瘍の新しい診断法の確立

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12217122
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 大工原 恭 鹿児島大学, 歯学部, 教授 (40028733)
• 研究分担者: 西山 腎龍 鹿児島大学, 医学部, 助手 (80264422) ; 梶原 武弘 鹿児島大学, 歯学部, 助手 (10305138)
• キーワード: 肝細胞増殖因子(HGF) / 細胞分散因子(SF) / 高感度ELISA / 尿試料 / 泌尿器系腫瘍 / 診断薬

研究概要

本研究はヒトHGF ELISA系を高感度化して、尿中のHGF濃度を泌尿器系腫瘍の早期発見、予後診断に利用することを目的として行ったものであり、以下の結果を得た。(1)ウサギ抗HGF抗体(IgG)をFab'化してβ-ガラクトシダーゼと結合させたものを2次抗体とし、1次抗体にはマウス抗HGFモノクローナル抗体を用いてサンドイッチELISA系(測定感度、1pg/ml)を調製した。これは、現在市販され臨床応用されているHGF ELISAの測定感度(0.2ng/ml)の200倍である。(2)健常者尿試料を用い、このELISAの回収試験、希釈試験、再現試験を行ったところ、いずれも満足すべき結果が得られ、尿試料を濃縮することなくHGFが測定可能となった。(3)上記のELISAで健常者尿試料(n=19)中のHGF濃度を測定すると、4.1-66.3pg/mlであり、これをそれぞれのクレアチニン濃度で補正すると、19.3±7.1(SD)pg/mgクレアチニンであった。(4)この濃度は、健常者血漿のHGF濃度(約200pg/ml)の1/50-1/3である。通常、尿中の血漿タンパク(例えばアルブミンやIgG)濃度は、血漿中の濃度の約1/1,000-1/5,000とされていることから考えると、我々が今回得た結果は、HGFが腎臓あるいはそれ以降の臓器で合成され、尿中に出現していることを強く示唆するものである。
上記の結果を踏まえて、種々の泌尿器系腫瘍及び炎症患者尿試料の測定を試み、診断薬としての可能性を検討したが、健常者尿中HGF濃度が予想外に高かったことから、膀胱がんや前立腺がんなどでは、平均値は健常者のそれに比べて有意に高いものの、クレアチニン値で補正しても有用なcut off値を見出すことは出来なかった。現在は、同一患者の尿中HGF濃度を病状と比較しつつ経時的に測定し、経過観察、予後診断に利用できないか検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Ohnishi,T.: "Prostaglandin E2 predominantly induces production of hepatocyte growth factor/scatter factor in human dental pulp in acute inflammation."J.Dent.Res.. 79. 748-755 (2000)
• [文献書誌] Sugiyama,A.: "Enhancement of hepatocyte growth factor (scatter factor) production by human gingival fibroblasts in culture stimulated with Porphyromonas gingivalis fimbriae."J.Med.Microbiol.. 49. 319-325 (2000)
• [文献書誌] Tamura,M.: "Structure and function of hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF)."Current Topics in Biochem.Res.. 2. 149-159 (2000)
• [文献書誌] Matsumori,B.: "Circulating hepatocyte growth factor as a marker of thrombus formation in unstable angina pectoris."Jpn.Circ.J.. 64. 805-807 (2000)
• [文献書誌] Ohnishi,T.: "Development of highly sensitive enzyme-linked immunosorbent assays for hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) : determination of HGF/SF in serum and urine from normal human subjects."J.Immunol.Meth.. 244. 163-173 (2000)
• [文献書誌] 田村正人: "HGF(肝細胞増殖因子)"蛋核酵. 45. 1152-1157 (2000)