HIVベクターの開発

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12217142
• 研究種目: 特定領域研究(C)
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 島田 隆 日本医科大学, 医学部, 教授 (20125074)
• 研究分担者: 三宅 弘一 日本医科大学, 医学部, 講師 (90267211)
• キーワード: HIVベクター / アデノウイルスベクター / エイズ / ATL

研究概要

HIVベクターはエイズ遺伝子治療を目的として我々が開発したベクターであり、CD4陽性リンパ球に特異的に高率に遺伝子導入が可能である。また、最近HIVベクターは非分裂細胞への遺伝子導入ベクターとして注目されており、これまでのウイルスベクターの欠点を補う新しいベクターとして注目されている。しかし、臨床応用に向けて、安全性の問題や効率の良い産生系がない点が研究を進める上で大きな問題点となっている。本研究では、遺伝子治療用ベクターとして現在もつとも期待されている組換えHIVベクターにつき、(1)安全性の改良および効率の良い産生系の確立、(2)標的遺伝子導入法の開発、(3)エイズ、ATLなどへの臨床応用への可能性の検討を行った。
(1)安全性の改良および効率の良い産生系の確立:HIVパッケイジングプラスミドは可能な限りのアクセサリー遺伝子を取り除き分割した。また、ベクターブラスミドはSINベクターとし、これらをアデノウイルスベクターに組み込み、アデノウイルスベクターを発現ベクターとして使う新しいパッケージング法の開発を検討した。アデノウイルスベクターを使用することにより、プラスミドをトランスフェクションした時よりもgag,pol,env,ベクター共に高い発現が得られ、カラム、および限外ろ過法を組み合わせた精製濃縮法にて、従来の方法より10倍以上力価の高いHIVベクターの作製に成功した。(2)標的遺伝子導入法の開発:オリゴデンドロサイト特異的なプロモータを用い、ラットの脳内へ遺伝子導入を試みたところ、オリゴデンドロサイトへ特異的な遺伝子導入が可能であった。(3)エイズ、ATLの遺伝子治療:HSV-TK遺伝子を組み込んだHIVベクターを用いることにより、HIV感染細胞を特異的に殺し、HIVの増殖を抑制したり、ATL細胞を特異的に殺すことが可能であった。また、HIVベクターがin vivoでも、リンパ球特異的に遺伝子導入できることを明らかにし、エイズ及びATLの遺伝子治療での有用性を示した。

研究成果

• [文献書誌] Miyake,K.,Shimada,T., et al.: "Selectivekilling of HIV infectedcells by targeted gene transfer and inducible gene expression using a recombinant HIV vector."Hum.Gene Ther.. 112. 227-233 (2001)
• [文献書誌] Nakano,K.,Shimada,T., et al.: "Differentiation of transplanted bone marrow cells in the adult mouse brain."Transplantation. (in press). (2001)
• [文献書誌] Sakai,N.,Shimada,T., et al.: "Selective transduction of HIV-1 infected cells by the combination of HIV and MLV vectors."Inter.J.Hematol.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Fujii,I.,Shimada,T., et al.: "Targeted and stable gene delivery into muscle cells by a two-step transfer system."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 275. 931-935 (2001)
• [文献書誌] Satoh,W.,Shimada,T., et al.: "Site-specific integration of an AAV vector plasmid mediated by regulated expression of Rep based on Cre/lox-p recombination."J.Virol.. 74. 10631-10638 (2000)
• [文献書誌] Suzuki,S.and Shimada,T.: "A retroviral vector capable of targeted gene transfer into cells expressing HIV envelope glycoprotein."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 271. 672-676 (2000)