ヒトパピローマウイルスによる発がん機構の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12219219
• 研究機関: 愛知県がんセンター
• 研究代表者: 清野 透 愛知県がんセンター, 腫瘍ウイルス学部, 室長 (10186356)
• 研究分担者: 藤田 雅俊 愛知県がんセンター, 腫瘍ウイルス学部, 主任研究員 (30270713) ; 中村 普武 愛知県がんセンター, 腫瘍ウイルス学部, 室長 (30109938)
• キーワード: ヒトパピローマウイルス(HPV) / E6 / トランスフォーメーション / 不死化 / TERT / p16^<INK4a>

研究概要

1.E6蛋白質による細胞トランスフォーメーション機構の解析
E6によるトランスフォーメーションにはE6のC末にあるPDZドメイン結合モチーフおよひE6APとの結合能の両者が必要であり、HPV18のE6を発現した細胞ではE6/E6APとhDLGの3者複合体形成により、hDLGの分解を促進していることが示唆された。同時にHPV型によるC末モチーフの多様性により標的蛋白質が単一でない可能性も示唆された。
2.E6蛋白質によるテロメラーゼ活性化機構の解析
E6によるTERTの転写活性化には、E6APとの結合が必要である。E6/E6AP複合体と結合する未知の標的蛋白質をコードするcDNAを分離した。このcDNAはRINGフィンガーモチーフを持つ未知の蛋白質をコード可能であり、この標的蛋白質の分解により、MycがTERTのプロモーターにアクセスできるようになるという仮説を中心に検討を進めている。
3.ヒト初代培養細胞の不死化
E6とE7の替わりに、bmi-1とTERTによりヒト正常乳腺上皮細胞が不死化できることが示された。また、ヒト食道上皮細胞の培養と不死化に成功し、その増殖と不死化様式はこれまで比較的特殊だと考えられていた2つの増殖停止期を示す乳腺上皮細胞と同一であることが分かった。これらの細胞で見られるp16INK4aの増加によるsenescence(M0期)はテロメアの短縮とは独立に起こり、上皮細胞に共通な現象であるという仮説を立て検証をすすめている。p16INK4aの転写制御にはプロモーターのメチル化、Bmi-1による抑制の他、ras、MAPキナーゼ経路、14-3-3σが関与しており、転写因子としてはJunBやEts-1,-2が正の、Id-1が負の制御に関わっていることが明らかになった。これらがM0期におけるp16INK4aの発現にどう関わっているか検討を進めている。

研究成果

• [文献書誌] Fujii,K. et al.: "The Epstein-Barr virus pol catalytic subunit physically interacts with the BBLF4/BSLF1/BBLF2/3 complex."Journal of Virology. 74. 2550-2557 (2000)
• [文献書誌] Yokoyama,N. et al.: "Co-expression of human chaperone Hsp70 and Hsdj or Hsp40 co-factor increases solubility of overexpressed target proteins in insect cells."Biochim Biophys Acta. 1493. 119-124 (2000)
• [文献書誌] Arata,Y. et al.: "Cdk2-dependent and -independent pathways in E2F-mediated S phase induction."J.Biological Chemistry. 275. 6337-6345 (2000)
• [文献書誌] Sawada,M. et al.: "p53 regulates ceramide formation by neutral sphingomyelinase through reactive oxygen species in human glioma cells."Oncogene. (in press). (2001)
• [文献書誌] 清野透: "ヒトパピローマウイルスによる発癌機構"日本婦人科腫瘍学会雑誌. 18. 131-138 (2000)
• [文献書誌] 清野透: "ヒトパピローマウイルス初期遺伝子の機能と発癌"現代医療. 32. 39-45 (2000)
• [文献書誌] 田矢洋一 編: "イラスト医学&サイエンス 細胞周期のしくみと癌"羊土社. 8 (2000)