難治性黄斑疾患の病因解明のための分子生物学的研究

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12307037
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 田野 保雄 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (80093433)
• 研究分担者: 瓶井 資弘 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (40281125) ; 山本 修士 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80294065) ; 不二門 尚 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (50243233) ; 森村 浩之 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (70314325)
• キーワード: 脈絡膜新生血管 / 遺伝子治療 / HVJ(仙台ウイルス)-liposome / Tissue inhibitor of metalloproteinase-3(TIMP-3)

研究概要

難治性黄斑疾患である脈絡膜新生血管は、主要な失明原因となりつつあるが、現在のところ決定的な治療法がなく、有効な治療手段の確立が急務とされている。網膜中心窩移動術をはじめとする手術治療やレーザー光線治療では良好な視力の維持に限界があり、必然的に遺伝子治療を含む新しい治療法の確立が望まれている。本研究では近年抗血管新生因子として注目集めているTissue inhibitor of metalloproteinases-3(TIMP-3)に焦点をあて、それを用いた遺伝子治療法の有用性をラット脈絡膜新生血管モデルで検討した。
本年度の研究ではまずHemagglutin(HA)を組み込んだTIMP-3ラットcDNA組替え体を作成した。これにより恒常的に発現している内因性TIMP-3と導入した外因性TIMP-3を区別することが可能で、外因性TIMP-3の導入発現効率を厳密に検討することができる。作成された遺伝子はHemagglutinating Virus of Japan(HVJ)-liposomeに封入されラット網膜下腔に注入された。術3日後に網脈絡膜のRNAを抽出し、外因性TIMP-3に含まれるHAの発現をReverse transcribed polymerase chain reaction(RT-PCR)法を用いて検討した。その結果、外因性TIMP-3mRNAは網脈絡膜で発現していた。また、同様に眼球の凍結切片を作成し免疫組織化学を行うと、導入されたTIMP-3は網膜色素上皮で特に強く発現していた。さらに、TIMP-3遺伝子の導入による脈絡膜血管新生への影響をレーザー光線による人工的脈絡膜新生血管モデルで検討すると、TIMP-3の遺伝子導入により血管新生は著明に抑制された。これらの知見から、TIMP-3を用いた遺伝子治療は脈絡膜血管新生に対して有効な治療法となり得る可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Saishin Y...Tano Y, et al.: "Retinal fascin : functional nature, subcellular distribution, and chromosomal localization"Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41(8). 2087-2095 (2000)
• [文献書誌] Fujikado T...Tano Y, et al.: "Comparison of visual function after foveal translocation with 360 degrees retinotomy and with scleral shortening in a patient with bilateral myopic neovascular maculopathy"American Journal of Ophthalmology. 130(4). 525-527 (2000)
• [文献書誌] Hayashi A...Tano Y, et al.: "Retinal changes after retinal translocation surgery with scleral imbrication in dog eyes"Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41(13). 4288-4292 (2000)
• [文献書誌] Cekic O...Tano Y, et al.: "Foveal translocation surgery and myopic subfoveal CNV membrane"Ophthalmology. 107(12). 2117-2117 (2000)
• [文献書誌] Takahashi T...Tano Y, et al.: "Inhibition of experimental choroidal neovascularization by overexpression of tissue inhibitor of metalloproteinases-3 in retinal pigment epithelium cells"American Journal of Ophthalmology. 130(6). 774-781 (2000)
• [文献書誌] Fujikado T...Tano Y, et al.: "Visual function after foveal translocation with 360-degree retinotomy and simultaneous torsional muscle surgery in patients with myopic neovascular maculopathy."American Journal of Ophthalmology. 131(1). 101-110 (2001)