中枢神経系幹細胞の分化機構の解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12308042
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 岡野 栄之 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (60160694)
• 研究分担者: 澤本 和延 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (90282350)
• キーワード: ネスチン / Green Fluorescent Protein(GFP) / 脳室周囲部 / 神経幹細胞 / トランスジェニックマウス / セルソーター

研究概要

我々は、神経幹細胞のマーカーであるNestinの遺伝子のエンハンサー領域を用いて、Green Fluorescent Protein(GFP)という緑色の蛍光を発するタンパク質を神経幹細胞のみに発現させる技術を開発することに成功した.
神経幹細胞を生きた状態で同定し、これを分離することができるように、神経幹細胞で選択性高く発現しているnestin遺伝子のエンハンサー制御下で蛍光物質であるGreen Fluorescence Protein(GFP)をコードする遺伝子をおいたレポーターコンストラクト(nestin-EGFP)を作成し、これを神経組織へと導入した。nestin-EGFPレポーター遺伝子を有するトランスジェニックマウスにおいては、神経幹細胞を含む未分化な細胞が密集している脳室周囲部(Ventricular Zone,VZ)に強い蛍光が観察された。EGFP陽性の細胞をセル・ソーター法により分離したところ、マーカーの発現、多分化能、自己複製能などの指標を満たす神経幹細胞活性が濃縮できることが認められた。また、同レポーター遺伝子は、成人脳内に存在する神経幹細胞/神経前駆細胞を同定・分離する上でも有効であることを見出した。

研究成果

• [文献書誌] Ayano Kawaguchi: "Nestin-EGFP transgenic mice : visualization of self-renewal and multipotency of the CNS stem cells."Molecular Cell.Neuroscience. 17. 259-273 (2001)
• [文献書誌] Hitoshi Sawa: "Components of the SWI/SNF complex are required for asymmetric cell division in C.elegans."Molecular Cell. 6. 617-624 (2000)
• [文献書誌] Akinori Yoda: "MSI-1,a neural RNA-binding protein, is involved in the male mating behavior in Caenorhabditis elegans."Genes to Cells. 5. 885-895 (2000)
• [文献書誌] Mamoru Shibata: "Caspase determines the vulnerability of oligodendrocytes in cerebral white matter in ischemia."The Journal of Clinical Investigation. 106. 643-653 (2000)
• [文献書誌] Shin Hisahara: "Caspase-11mediates oligodendrocyte cell death and pathogenesis of auto-immune mediated demyelination."Journal of experimental medicine. 193. 111-122 (2001)
• [文献書誌] Hideyuki Okano: "Learning and memory."Proceeding of the National Academy of Science of the United States of America. 97. 12403-12404 (2000)
• [文献書誌] Hideyuki Okano: "Proceeding of International workshop : Stem Cell Biology and Molecular Treatment."Sakuragawa, N.. 13 (2000)
• [文献書誌] Hideyuki Okano: "5th International Symposium on Tissue Engineering for Therapeutic Use"Ikada, Y.(in press). (2000)