2000 年度実績報告書

魚類における細胞性免疫を誘導する抗原エピトープの解析システムの開発

研究課題

研究課題/領域番号	12460088
研究機関	日本大学
研究代表者	中西照幸日本大学, 生物資源科学部, 教授 (00322496)
研究分担者	森友忠昭日本大学, 生物資源科学部, 講師 (20239677) 岡本信明東京水産大学, 水産学部, 教授 (40114912)
キーワード	細胞性免疫 / 細胞障害試験 / MHC クラスI / ウイルス / 長期培養細胞 / ニジマス / ギンブナ / ヒラメ
研究概要	1.MHCクラスIを共有するドナーと標的細胞の選択系統が異なるホモ接合体クローンニジマス5尾、野生型ニジマス3系統9尾及び3種のニジマス細胞株より、全長のMHCクラスI遺伝子を単離し塩基配列を明らかにした。構造解析の結果α1及びα2領域における抗原結合に関与する主なアミノ酸は保存されており、ノザンブロット解析により筋肉や肝臓を除く全ての組織で発現していること及び多型性に富むこと等から、単離した遺伝子は抗原提示に関与する古典的クラスI遺伝子と考えられた。また、野生型個体では2個、ホモ接合体では1個の対立遺伝子のみ発現しており、サザンブロット分析からも遺伝子座は1個と推定された。さらに、5系統のうち2系統(C25,AB7)のクローンニジマスとRTG-2,RTH細胞株の対立遺伝子が一致することが明らかとなった。以上のことから、ドナー及び標的細胞として、C25,AB7系統のクローンニジマスとRTG-2,RTH細胞株が適していることが明らかとなった。 2.ギンブナにおけるウイルス抗原特異的細胞障害試験法の確立諏訪湖産3倍体ギンブナ(S3N)と同系統に由来する細胞株(CFS)を用いて、伝染性膵臓壊死症ウイルス(IPNV)及びウナギラブドウイルス(EVA)に感染した標的細胞に対する細胞障害性について検討した。その結果、S3Nドナー由来のリンパ球は、事前にドナーの感作に用いたウイルスに感染したCFS細胞にのみ細胞障害性を示すことが明らかとなった。 3.クローン魚由来の長期培養細胞の樹立長期培養細胞の樹立のための適切な組織を選定するために、先ず人工雌性発生法により作出したクローンヒラメを用いて検討した。その結果、鰭及び腎臓より100代以上継代が可能な上皮性及び繊維芽様細胞が得られ、RAPD法により、これらの細胞が供試したクローン魚に由来することが確認された。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Somamoto,T.,Nakanishi,T.and Okamoto,N.: "Specific cell-mediated cytotoxicity against a virus-infected syngeneic cell line in isogeneic ginbuna crucian carp."Dev.Comp.Immunol.. 24. 633-640 (2000)
[文献書誌] Dijkstra,J.M.,H.Okamoto,M.Ototake,and T.Nakanishi: "Luciferase expression 2 years after DNA injection in glass catfish (Kryptopterus bicirrhus)."Fish & Shellfish Immunol.. 11. 199-202 (2001)
[文献書誌] Somamoto T,Nakanishi T,Okamoto N.: "Cell-mediated cytotoxicity of ginbuna crucian carp after infection with crucian carp haematopoietic necrosis virus (CHNV)."Dev.Comp.Immunol.. 24. 7 (2000)
[文献書誌] Dijkstra JM,Kollner B,Fischer U,Aoyagi K,Kuroda A,Ototake M,Nakanishi T.: "The rainbow trout classical MHC class I molecule Onmy-UBA^*501 is N-glycosylated and expressed in similar cell types as mammalian classical MHC class I molecules."Dev.Comp.Immunol.. 24. 75 (2000)
[文献書誌] Kollner B,Dijkstra JM,Fischer U,Schuetze H,Nakanishi T.: "Influence of cultivation temperature and viral infection of RTG-2 cells on the expression of rainbow trout classical MHC class I molecule"Dev.Comp.Immunol.. 24. 77 (2000)
[文献書誌] Ototake M, Okamura K,Hashimoto K,Nakanishi T.: "The function of the most primitive MHC class I"Dev.Comp.Immunol.. 24. 79 (2000)
[文献書誌] 中西照幸: "家畜ゲノム解析と新たな家畜育種戦略(畜産技術協会)"魚類における疾病抵抗性の遺伝と抵抗性系統の作出. 359-362 (2000)

2000 年度 実績報告書

魚類における細胞性免疫を誘導する抗原エピトープの解析システムの開発

研究代表者

中西 照幸 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (00322496)

研究成果

[文献書誌] Somamoto,T.,Nakanishi,T.and Okamoto,N.: "Specific cell-mediated cytotoxicity against a virus-infected syngeneic cell line in isogeneic ginbuna crucian carp."Dev.Comp.Immunol.. 24. 633-640 (2000)

[文献書誌] Dijkstra,J.M.,H.Okamoto,M.Ototake,and T.Nakanishi: "Luciferase expression 2 years after DNA injection in glass catfish (Kryptopterus bicirrhus)."Fish & Shellfish Immunol.. 11. 199-202 (2001)

[文献書誌] Somamoto T,Nakanishi T,Okamoto N.: "Cell-mediated cytotoxicity of ginbuna crucian carp after infection with crucian carp haematopoietic necrosis virus (CHNV)."Dev.Comp.Immunol.. 24. 7 (2000)

[文献書誌] Dijkstra JM,Kollner B,Fischer U,Aoyagi K,Kuroda A,Ototake M,Nakanishi T.: "The rainbow trout classical MHC class I molecule Onmy-UBA^*501 is N-glycosylated and expressed in similar cell types as mammalian classical MHC class I molecules."Dev.Comp.Immunol.. 24. 75 (2000)

[文献書誌] Kollner B,Dijkstra JM,Fischer U,Schuetze H,Nakanishi T.: "Influence of cultivation temperature and viral infection of RTG-2 cells on the expression of rainbow trout classical MHC class I molecule"Dev.Comp.Immunol.. 24. 77 (2000)

[文献書誌] Ototake M, Okamura K,Hashimoto K,Nakanishi T.: "The function of the most primitive MHC class I"Dev.Comp.Immunol.. 24. 79 (2000)

[文献書誌] 中西照幸: "家畜ゲノム解析と新たな家畜育種戦略(畜産技術協会)"魚類における疾病抵抗性の遺伝と抵抗性系統の作出. 359-362 (2000)

2000 年度実績報告書

中西照幸日本大学, 生物資源科学部, 教授 (00322496)