神経堤細胞の異常による疾患の分子遺伝学的解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470033
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 幡野 雅彦 千葉大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (20208523)
• 研究分担者: 岡田 誠治 千葉大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50282455) ; 徳久 剛史 千葉大学, 大学院・医学研究科, 教授 (20134364)
• キーワード: Ncx / 神経堤細胞 / 転写因子 / ノックアウトマウス / 腸管神経節 / 膀胱神経節 / Yeast one hybrid

研究概要

1.私達はNcxプロモーター領域の解析から神経堤細胞特異的にNcxの発現を制御するDNA領域を決定した。またゲルシフトアッセイの結果よりこのエレメントに結合する蛋白が存在することを示した。そこでこのDNAエレメントの配列をタンデムに3つ組み込んだyeast用レポータープラスミドを作成し、yeast one hybrid法により結合蛋白を検索した。マウス12日胎児ライブラリーをスクリーニングし、これまでに未知遺伝子を含め6種類のcDNA断片が得られた。現在それらについてシークエンスおよび発現パターンの解析を行っているところである。
2.Ncxノックアウトマウスは生後3〜4週齢で腸管神経節神経細胞の増加を伴った巨大結腸症を発症する。巨大結腸を発症する以前より神経細胞の増加により腸管の運動機能異常が認められることが明らかとなった。また腸管以外の神経堤由来の神経細胞についても調べたところ膀胱神経節においても神経細胞の増加と膀胱機能異常(括約筋機能不全)が認められることを明らかにした(Jusuf et al.,J.Urol.2001)。
3.Ncxにより制御されている遺伝子群をrepresentational difference analysis(RDA)法によってクローニングした。その1つであるNd1(Ncx downstream 1)はkelchファミリーに属する蛋白で、アクチンと結合することによりcytokinesisを制御していることを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Shimizu,H. et al.: "Identification of an optimal Ncx binding sequence required for transcriptional activation."FEBS letters. 475・3. 170-174 (2000)
• [文献書誌] Jusuf,A.A. et al.: "Vesico-urethral sphincter dysfunction in mice with hyperinnervation of neuronal cells in vesical ganglia."J.Urology. 165・3. 993-998 (2001)
• [文献書誌] Okada,S. et al.: "Impairment of B lymphopoiesis in precocious aging (Klotho) mice."Int.Immunol.. 12・6. 861-871 (2000)
• [文献書誌] Nakao,A. et al.: "Blockade og TGF-b/Smad signaling in T cells by expression of Smad7 enhances antigen-induced airway inflammation and airway reactivity."J.Exp.Med.. 192・2. 151-158 (2000)
• [文献書誌] Kojima,S. et al.: "Disruption of the Bcl6 gene increases testicular germ cell apoptosis in mice."Development. 128・1. 57-65 (2001)
• [文献書誌] Mizushima,N. et al.: "Mammalian Apg5 localizes on autophagosome precursors and is essential for autophagosome formation."J.Cell Biol.. (In press). (2001)