コンディショナルジーンターゲティング法による生体内糖脂質の機能解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470055
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 竹田 潤二 大阪大学, 先端科学技術共同研究センター, 教授 (50163407)
• 研究分担者: 近藤 玄 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40243258)
• キーワード: LCB2遺伝 / Cre / loxP / Tリンパ球 / コンディショナルジーンターゲティング / スフィンゴ脂質 / キメラマウス / トランスジェニックマウス

研究概要

1、コンディショナルターゲティング用マウス(LCBflox)の樹立
LCB染色体遺伝子の第4エクソンをloxPで挟み込むようなコンストラクトを構築した。第3イントロンにはES細胞での薬剤選択のためのNeo遺伝子が挿入されている。このNeo遺伝子もloxP配列で挟み込まれるようにデザインされている。これは、イントロンに挿入されたNeo遺伝子によりLCB2遺伝子の転写効率を下げることが想像されるので、相同組換え体を得たあとにNeo遺伝子を除くための工夫である。
まず、ターゲディングコンストラクトをES細胞に導入し、相同組換え体を得、そのクローンからキメラマウスまだNeo遺伝子を保持したまま)を作製した。germlinetransmissionが確認できたのでElla-Creトランスジェニックマウスと交配し、Neo遺伝子のみ(LCB2の第4エクソンはintact)が除去されたマウス(コンディショナルターゲティング用マウス)を樹立した。
2、スフィンゴ脂質欠損Tリンパ球を解析するためLCBfloxマウスとLck-Creマウスの交配
Tリンパ球特異的にLCB2遺伝子を破壊し、スフィンゴ脂質が欠損したTリンパ球を有するマウスを交配により樹立した。スフィンゴ脂質が欠損したTリンパ球は、CD8+細胞になる比率が極端に減少していた。すなわち、CD8+細胞になるために、スフィンゴ脂質が重要な役割をはたしていることが判明した。

研究成果

• [文献書誌] Ohishi K,N.Inoue,Y.Maeda,J.Takeda,H.Riezman,and T.Kinoshita: "Gaal and Gpi8p are components of a glycosylphosphatidylinositol (GPI) transamidase that mediate attachment of GPI to proteins."Mol.Biol.Cell. 11. 1523-1533 (2000)
• [文献書誌] Kawamoto S.,H.Niwa,F.Tashiro,S.Sano,G.Kondoh,J.Takeda,K.Tachibana,J.Miyazaki: "A novel reporter mouse strain that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated recombination."FEBS lett.. 470. 263-268 (2000)
• [文献書誌] Sano,S.,M.Kira,S.Takagi,K.Yoshikawa,J.Takeda,and S.Itami: "Two distinct signaling pathways in hair cycle induction : Stat3-dependent and -independent pathways."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 97. 13824-13829 (2000)
• [文献書誌] Takeda,J.,S.Sano,M.Tarutani,J.Umeda,and G.Kondoh: "Conditional gene targeting and its application in the skin."J.Derm.Sci.. 23. 147-154 (2000)
• [文献書誌] Kinoshita T.,M.Bessler,J.Takeda: "Academic Press"Animal Model of PNH,PNH and GPI-linked proteins edited by N.S.Young and Moss. 139-158 (2000)