ネズミマラリア原虫オオキネートの媒介蚊中腸細胞への侵入の分子機構

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12470060
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 油田 正夫 三重大学, 医学部, 助手 (90293779)
• 研究分担者: 安藤 勝彦 三重大学, 医学部, 助教授 (90024710) ; 鎮西 康雄 三重大学, 医学部, 教授 (60024709)
• キーワード: ネズミマラリア / オオキネート / CTRP / ノックアウト原虫 / ハマダラカ / 接着侵入

研究概要

マラリア原虫オオキネートの媒介蚊中腸細胞への感染機構は全く解析されていない。我々は接着性タンパク質様構造をもつCTRPとよぶ分子をクローニングし、この分子がオオキネートに特異的に発現することを明らかにした。本研究では、オオキネートの蚊中腸細胞への接着、侵入におけるCTRPの働きを詳細に明らかにすること、その他接着侵入関連分子の検索と接着侵入機構の解析を目的として以下の実験を行った。
1.CTRP遺伝子をgene targetting法によりノックアウトした原虫を作製した。この原虫はCTRP発現は出来ず、オオキネート形成はできるものの、オーシスト形成は全くおこらず、CTRPがオオキネートの中腸細胞侵入にとって重要な機能をもつことを示した。
2.CTRPの細胞内局在を明らかにする実験を行った。CTRP cDNAを大腸菌によってGST融合タンパク質として発現し、抗体を作製した。この抗体を用いて、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡観察を行った。その結果、CTRPはオオキネートのミクロネームに局在することが判明した。
3,オオキネートcDNAライブラリーを作製し、ランダムシーケンスを行って、データベース検索を行うと共に、機能分子と思われるクローンについて注目し、発現させて機能を調べる実験を行った。その結果、新たな分泌性のミクロネームタンパク質が見つかった。これについては論文として投稿した(印刷中)

研究成果

• [文献書誌] J.Fu, et al.: "Epitope-specific impairment of production of antibody against merozoite surface glycoprotein 1 of Plasmodium in symptomatic with malaria."Parasitol.Res.. 86:. 345-351 (2000)
• [文献書誌] Jun Fu, et al.: "A simple screening method detecting bindings between oligopeptides and HLA-DR molecules on filter paper : Possible application for mapping of putative helper T cell epitopes on MSPI of Plasmodium falciparum."Microbiol.Immunol.,. 44:. 249-257 (2000)
• [文献書誌] M.Adachi, et al.: "Detection of congenital malaria by polymerase-chain reaction methodology in Dar es Salaam, Tanzania."Parasitol Res.. 86:. 615-618 (2000)
• [文献書誌] M.Adachi, et al.: "Scant parasitemia in balb/c mice with congenital malaria infection."J.Parasitol.,. 86:. 1030-1034 (2000)
• [文献書誌] M.Yuda, et al.: "von Willebrand Factor A Domain -related Protein : A novel micoroneme protein of Plasmodium berghe."Mol.Bolchem.Parasitol.. (in press).