2000 年度実績報告書

放射線誘発細胞死のシグナル伝達および核変性の解析

研究課題

研究課題/領域番号	12470185
研究機関	東京大学
研究代表者	鈴木紀夫東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (10010050)
研究分担者	平野和也東京薬科大学, 薬学部, 講師 (80251221) 榎本敦東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20323602) 松本義久東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20302672)
キーワード	放射線誘発アポトーシス / SAPK / JNK / セラミド / MOLT-4 / p41特異抗体
研究概要	放射線高感受性のMOLT-4細胞の照射後応答のシグナル伝達経路に関与する上流分子郡と新規誘導タンパクp41がどのように放射線誘発細胞死に関与しているか解明することを目的とした。 X線で照射後、急速なviabilityの低下を示し、Caspase/CADの活性化を伴い細胞死を呈すが典型的なDNA ladderを示さない。p53はwild typeとされ、p21WAF1とともに照射後増加するが、Baxは増加しなかった。この急速なviabilityの低下が酸性スフィンゴミエリナーゼ阻害剤(D609)によって有意に抑制された(p53,WAF-1誘導は阻害せず)。MOLT-4とFM3A細胞からRadiation-hybrid法により樹立したX線抵抗性雑種Rh-1a細胞ではBcl-2やp53タンパクの発現量に親株との違いはなく、X線、セラミド誘発アポトーシスの間で交差抵抗性を示した。一方、MOLT/mbcl-2細胞は、X線、セラミド誘発アポトーシスに対して強い抵抗性を示した。 MOLT-4細胞ではX線照射やC2-ceramide処理後、SAPK/JNKの持続的な強い活性化が見られたが、Bcl-2過剰や酸性スフィンゴミエリナーゼ阻害剤で前処理したMOLT-4細胞ではX線照射後のSAPK/JNK活性化が抑制されており、Rh-1a細胞では、照射後、一過性の弱いSAPK/JNK活性化を呈した。このことからMOLT4細胞死の誘導には一過性ではなく持続的で高いSAPK/JNK活性化が必要でp53非依存性セラミド経路が重要であると考えられた。 p42特異抗体とp41特異抗体(p42の切断後に露出するようになるグリシン19のアミノ基と、その後続アミノ酸配列を特異的に認識する切断部位特異的抗体)を作製した。今後、当初の目的に沿って解析を進める予定である。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Matsumoto,Y.: "Cleavage and phosphorylation of XRCC4 protein induced by X-irradiation."FEBS Lett.. 478. 67-71 (2000)
[文献書誌] Tomita,M.: "Sensitization by wortmannin of heat- or X-ray induced cell death in cultured chinese hamster V79 cells."J.Radiat.Res.. 41. 93-102 (2000)
[文献書誌] Enomoto,A.: "Involvement of SAPK/JNk pathway in X-ray-induced rapid cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4."Cancer Lett.. 155. 137-144 (2000)
[文献書誌] Morita,A.: "p41as a possible marker for cell death is generated by caspase cleavage of p42/SETβin irradiated MOLT-4 cells."Biochemical and Biophysical Reaearch Communications. 278. 627-632 (2000)
[文献書誌] Kang,Y.: "Increased expression after X-irradiation of MUC1 in cultured human colon carcinoma HT-29 cells."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 324-330 (2000)
[文献書誌] H.-J.Zhao,: "DNA-dependent protein kinase activity correlates with Ku70 expression and radiation sensitivity in esophageal cancer cell lines."Clin.Cancer Res.. 6. 1073-1078 (2000)
[文献書誌] Sakata,K.: "Expression of Genes involved in Repair of DNA Double-strand Breaks in Normal and Tumor Tissues."Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.. 49. 161-167 (2001)
[文献書誌] Enomoto,A.: "Involvement of c-Jun NH_2-terminal kinase-1 in heat-induced apoptotic cell death of human monoblastic leukemia U937 cells."Int.J.Radiat.Biology. (in press). (2001)

2000 年度 実績報告書

放射線誘発細胞死のシグナル伝達および核変性の解析

研究代表者

鈴木 紀夫 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (10010050)

研究成果

[文献書誌] Matsumoto,Y.: "Cleavage and phosphorylation of XRCC4 protein induced by X-irradiation."FEBS Lett.. 478. 67-71 (2000)

[文献書誌] Tomita,M.: "Sensitization by wortmannin of heat- or X-ray induced cell death in cultured chinese hamster V79 cells."J.Radiat.Res.. 41. 93-102 (2000)

[文献書誌] Enomoto,A.: "Involvement of SAPK/JNk pathway in X-ray-induced rapid cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4."Cancer Lett.. 155. 137-144 (2000)

[文献書誌] Morita,A.: "p41as a possible marker for cell death is generated by caspase cleavage of p42/SETβin irradiated MOLT-4 cells."Biochemical and Biophysical Reaearch Communications. 278. 627-632 (2000)

[文献書誌] Kang,Y.: "Increased expression after X-irradiation of MUC1 in cultured human colon carcinoma HT-29 cells."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 324-330 (2000)

[文献書誌] H.-J.Zhao,: "DNA-dependent protein kinase activity correlates with Ku70 expression and radiation sensitivity in esophageal cancer cell lines."Clin.Cancer Res.. 6. 1073-1078 (2000)

[文献書誌] Sakata,K.: "Expression of Genes involved in Repair of DNA Double-strand Breaks in Normal and Tumor Tissues."Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.. 49. 161-167 (2001)

[文献書誌] Enomoto,A.: "Involvement of c-Jun NH_2-terminal kinase-1 in heat-induced apoptotic cell death of human monoblastic leukemia U937 cells."Int.J.Radiat.Biology. (in press). (2001)

2000 年度実績報告書

鈴木紀夫東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (10010050)